[发明专利]一株屎肠球菌的培养方法及应用

说明书

技术领域

本发明涉及一株屎肠球菌的培养方法及其应用，属于微生物技术领域。 

背景介绍 

目前饲料和畜禽养殖中滥用抗生素、化学合成药物、激素、β-兴奋剂、重金属、镇静剂等促生长保健剂，导致一系列问题和后果，包括：畜禽产品中药物残留严重；细菌耐药性增强、耐药菌株增多；各种耐药性病菌可以通过食品传给人，产生很难治愈的疾病。这些问题及其严重的后果极大地威胁着食品安全，影响着动物和人类的健康。 

鉴于上述饲料和畜禽养殖中存在的诸多问题，中国已启动“饲料安全工程”，并禁用了一批毒性和残留较大的药物。国家《饲料工业“十二五”发展规划》明确指出要加快新型饲料添加剂的开发与生产，尤其是替代抗生素的饲料添加剂的生产。因此，微生态制剂作为一种绿色、安全的饲料添加剂成为产业化开发的热点，是替代抗生素的潜在产品之一。 

作为消化道内固有菌群，乳酸菌具有调节肠道菌群平衡、抑制有害菌生长、增强免疫力等作用。目前市售微生态制剂产品在实际使用中具有提高畜禽生产性能，防治畜禽消化道疾病的功效，但是很多产品也存在一些缺陷：活菌数达不到产品标注的量，致使产品的功效大打折扣；后处理条件太过激烈导致干燥后的菌粉产品含有大量死亡菌体，微生物活性大量损失。 

因此，研制出一种低成本、高产量并能长期保持活性的乳酸菌微生态制剂，对于发展绿色饲料，保证饲料安全具有重要的意义。 

发明内容

本发明针对现有技术的不足提供了一株屎肠球菌(Enterococcus faecium)WEI-9CGMCC No.7745的大规模发酵培养方法及其在生产微生态制剂中的应用。屎肠球菌(Enterococcus faecium)WEI-9，并于2013年6月19日送中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心保藏，编号为CGMCC No.7745，保藏地址：北京市朝阳区北辰西路1号院中科院微生物研究所邮编：100101。 

本发明所提供的屎肠球菌(Enterococcus faecium)WEI-9CGMCC No.7745的大规模发酵 培养方法，是将屎肠球菌(Enterococcus faecium)WEI-9CGMCC No.7745接种到该菌的专用液体培养基中，30-40℃下静置或不通气培养。所述专用液体培养基的配方为：每1000mL水中含有：乳清粉10-30g，蛋白胨10-30g，柠檬酸铵1-3g，三水合乙酸钠2-8g，七水合硫酸镁0.1-0.5g，一水合硫酸锰0.02-0.08g，三水合磷酸氢二钾1-3g，吐温80 0.5-1.5g，pH值为6.5-7.5。 

在上述培养方法中，接种比例为1％；培养温度为37-40℃；静置或不通气培养，培养时间为10-12h。 

优选的专用液体培养基的配方为：每1000mL水中含有：乳清粉21.34g，蛋白胨21.94g，柠檬酸铵2g，三水合乙酸钠5g，七水合硫酸镁0.2g，一水合硫酸锰0.05g，三水合磷酸氢二钾2g，吐温80 1g，pH值为7。 

在50L发酵罐条件下，利用上述培养基在37℃，50rpm，不通气条件下发酵获得的屎肠球菌(Enterococcus faecium)WEI-9CGMCC No.7745发酵液活菌数达到2×10⁹-3×10⁹CFU/mL，而在同样条件下，屎肠球菌(Enterococcus faecium)WEI-9CGMCC No.7745在MRS培养基中的活菌数为6.5×10⁸CFU/mL，优化后的培养基使得活菌数提高3-4倍。 

本发明所提供的屎肠球菌(Enterococcus faecium)WEI-9CGMCC No.7745在微生态制剂制备中的应用，是将屎肠球菌(Enterococcus faecium)WEI-9CGMCC No.7745按照上述培养基和培养条件发酵获得的发酵液通过高速管式离心机收集菌体后，与保护剂混合均匀，先于-70℃预冻，然后置于真空冷冻干燥机中干燥后获得活性菌粉，将菌粉用粉碎机破碎后与同样粒度的麸皮混合，获得微生态制剂产品。 

所述高速管式离心机收集菌体的转速为15000-20000rpm。