[发明专利]TNF-α诱导的人脐静脉内皮细胞HUVEC炎症反应模型的制备方法在审
| 申请号： | 201310718727.9 | 申请日： | 2013-12-24 |
| 公开（公告）号： | CN104726393A | 公开（公告）日： | 2015-06-24 |
| 发明（设计）人： | 黄午阳;王兴娜;李春阳;闫征;王帆;王健 | 申请（专利权）人： | 江苏省农业科学院 |
| 主分类号： | C12N5/071 | 分类号： | C12N5/071 |
| 代理公司： | 无 | 代理人： | 无 |
| 地址： | 210014*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | tnf 诱导 静脉 内皮 细胞 huvec 炎症 反应 模型 制备 方法 | ||
1.TNF-α诱导的人脐静脉内皮细胞HUVEC炎症反应模型的制备方法，包括了以下步骤：
1)用M199完全培养基(1含酚红、20％新生小牛血清、2mmol／L L-谷氨酰胺、100U／ml青霉素、100U／ml链霉素、100μg／ml血管内皮细胞生长因子-肝素)置于37℃，5％CO2的温箱中培养HUVEC细胞
2)HUVEC细胞长满至80％-90％单层，用15ml的1mg/ml的I型胶原酶消化15-20min制备成细胞悬液，取10ul于血球计数板上计数，调整细胞浓度为1*106／ml。
3)取2ml细胞悬液至6孔板进行培养，当细胞长满至90％时，换无血清的培养基进行饥饿培养24h，使所有HUVEC细胞同步化。
4)加入终浓度为10ng／ml的TNF-α，刺激6h，取细胞上清，根据ELISA法，取细胞上清液在酶标仪450nm下测定OD值看细胞炎症因子MCP-1、ICAM-1、VCAM-1，发现蛋白含量均升高。
2.根据权利要求1所述TNF-α诱导的人脐静脉内皮细胞HUVEC炎症反应模型的制备方法，其特征在于：HUVEC细胞用M199完全培养基(含酚红、20％新生小牛血清、2mmol／L L-谷氨酰胺、100U／ml青霉素、100U／ml链霉素、100μg／ml血管内皮细胞生长因子-肝素)于37℃，5％CO2培养，长满至80％-90％单层。
3.根据权利要求1所述TNF-α诱导的人脐静脉内皮细胞HUVEC炎症反应模型的制备方法，其特征在于：加入15ml的胶原酶I型(1mg／ml)在37℃消化制备成细胞悬液。
4.根据权利要求1所述TNF-α诱导的人脐静脉内皮细胞HUVEC炎症反应模型的制备方法，其特征在于：细胞悬液调整浓度为1*106／ml。
5.根据权利要求1所述TNF-α诱导的人脐静脉内皮细胞HUVEC炎症反应模型的制备方法，其特征在于：2ml细胞悬液至6孔板培养，当细胞长满至90％时换无血清的培养基进行饥饿培养24h。
6.根据权利要求1所述TNF-α诱导的人脐静脉内皮细胞HUVEC炎症反应模型的制备方法，其特征在于：加入终浓度为10ng／ml的TNF-α，刺激HUVEC细胞6h。
7.根据权利要求1所述TNF-α诱导的人脐静脉内皮细胞HUVEC炎症反应模型的制备方法，其特征在于：取细胞上清液用EELISA法，在酶标仪450nm下测定OD值，检测细胞炎症因子MCP-1、ICAM-1、VCAM-1，蛋白含量均升高。
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