[发明专利]微RNA-34a的小分子调节剂

说明书

相关申请的交叉引用

本申请要求于2012年12月21日递交的美国临时申请第61/745,348号的优先权，为所有目的其内容通过引用全部并入本文。

发明背景

微RNA通过调控基因表达在多种生物过程中起着关键作用。微RNA由真核生物核DNA编码，其被认为是通过与mRNA分子中的互补序列进行碱基配对来起作用。微RNA能提供对基因活性和表达的负调控(转录本降解和扣留(sequestering)、翻译抑制)和正调控(转录激活和翻译激活)。

微RNA在真核生物中具有良好的保守性，并被认为是基因调控的重要的且进化上古老的成分。人类基因组可编码1000多种微RNA，其可靶向约60%的哺乳动物基因，且在很多人类细胞类型中很丰富。

哺乳动物的微RNA通常仅表现出对其mRNA靶标的部分互补性。该部分互补性能够使得由较少数目的微RNA来组合调控大量基因。的确，组合调控是微RNA调控的一般特征；且给定的微RNA可具有多种不同的mRNA靶标，而给定的靶标可类似地被多种微RNA所靶向。

已充分证实在多种癌症中存在微RNA的异常表达。例如，微RNA可发挥作用以促进致癌基因或肿瘤抑制基因的效果。因而，微RNA代表了有前景的用于癌症治疗的治疗靶标，存在提供能够调节微RNA水平和/或活性以用于治疗目的的分子的需求。本发明满足了该需求和其他相关需求。

发明概述

本发明提供了抑制细胞增殖的方法，包括将细胞与有效量的以下化合物接触：

其中R₁、R₂、R₃、R₄、R₅、R₆独立地选自H、CH₃、CH₂CH₃、F、Cl、Br、NO₂、OH、COOH、NH₂、CF₃和CN。

在另一方面，R₁-R₅各自为CH₃，且R₆为H。

在另一方面，所述细胞为癌细胞。

在另一方面，所述癌细胞包括肝癌细胞。

在另一方面，所述细胞为内皮细胞。

在另一方面，所述细胞增殖包括血管生成。

在另一方面，所述细胞存在于患者体内。

在另一方面，接触步骤包括经皮下、肌肉内、静脉内、腹膜内或经口给予前述化合物。在一些情况下，所述给予是针对有需要的受试者，如表现出由细胞增殖引起的疾病的受试者。在一些情况下，所述由细胞增殖引起的疾病为癌症。在一些情况下，所述癌症为诸如肝癌的癌。

在一些情况下，所述方法还包括同时或顺次给予化学治疗剂、抗炎药物、免疫调节剂、抗呕化合物或抗贫血药物如诱导红细胞产生的药物。例如，抗贫血药物可为红细胞生成素。

在另一方面，所述方法还包括调节miRNA-34a。

在另一方面，所述方法还包括激活miRNA-34a。

在另一方面，所述方法还包括下调细胞周期蛋白D1。

在另一方面，相比没有被接触的细胞，所述miRNA-34a的活性或表达增加了至少3倍或者降低至至少1/3。

在另一方面，使用编码报告基因的多核苷酸检测调节miRNA-34a的步骤。

在另一方面，所述编码报告基因的多核苷酸包含编码荧光素酶或荧光蛋白的序列。

在一个实施方案中，本发明提供了一种方法，其包括如下步骤：(a)将细胞与候选化合物接触，所述细胞含有表达盒，所述表达盒包含：(i)编码报告基因的多核苷酸序列，其可操作地连接至在细胞内具有活性或可诱导的5’启动子；和(ii)编码miRNA-34a结合位点的多核苷酸序列，其可操作地连接至所述报告基因的3’端；(b)当所述细胞至于允许所述报告基因表达的条件下时，检测所述报告基因的表达水平；和(c)当相比缺少所述化合物的情况下的报告基因的表达水平，报告基因的表达水平降低时，鉴定所述化合物作为miRNA-34a激活剂，而当相比缺少所述化合物的情况下的报告基因的表达水平，报告基因的表达水平增加时，鉴定所述化合物作为miRNA-34a抑制剂。

在另一方面，所述报告基因为荧光素酶或荧光蛋白。

在另一方面，所述细胞为癌细胞。