[发明专利]口蹄疫灭活疫苗中间品或抗原146S含量的测定方法无效
申请号: | 201310717661.1 | 申请日: | 2013-12-23 |
公开(公告)号: | CN103698290A | 公开(公告)日: | 2014-04-02 |
发明(设计)人: | 董金杰;王凡;智晓莹;常艳燕;乔莉萍;刘学荣;牟克斌;王超英;黄银君;张云德;殷宏 | 申请(专利权)人: | 中农威特生物科技股份有限公司 |
主分类号: | G01N21/33 | 分类号: | G01N21/33 |
代理公司: | 北京科亿知识产权代理事务所(普通合伙) 11350 | 代理人: | 汤东凤 |
地址: | 730046 甘肃*** | 国省代码: | 甘肃;62 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 口蹄疫 疫苗 中间 抗原 146 含量 测定 方法 | ||
1.口蹄疫灭活疫苗中间品或抗原146S含量的测定方法,其特征是,包括以下步骤:
(1) 样品前处理,步骤如下:
1) 在无菌条件下将中间品或抗原样品分装于灭菌管;
2) 将分装后的中间品平衡后置于高速台式离心机内,在 4℃条件下离心5min;
3)吸取上清液即为试验用样品;
(2)将实验用样品直接用于蔗糖密度梯度离心,步骤如下:
1)使用自动梯度制备仪制备梯度;
2)打开离心机进行自检测试,确保离心机可以正常运转;
3)测试完成后,打开舱门,将样品加入蔗糖梯度上层,用配制好的TNE缓冲液两两平衡,放入离心管内,拧紧离心管盖子,再将相应数字的离心管挂到水平离心管架上,放入离心机内,并记录样品号与相对应的离心管号后盖上离心盖,关闭舱门;
4)开始离心
离心参数如下:
转速为35000rpm/min
温度为10℃
时间为3h
5) 离心结束后,取出离心管,拧开离心管盖子,取出蔗糖梯度,弃掉上层液体,将离心后的样品放置4℃待检;
(3) 通过使用连续紫外检测仪器,对离心后的样品进行连续检测: 在259nm波长下测定紫外吸光度,并根据紫外吸光度记录并保存检测曲线;
(4) 根据检测出的曲线,对146S抗原峰手动积分,结合1μg口蹄疫146S抗原的峰面积(321.4mAU.s),计算样品146S抗原含量,从而得到所需数据。
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