[发明专利]一种检测液体中内毒素含量的方法

权利要求书

1.一种检测液体中内毒素含量的方法，包括以下步骤：

步骤1)将含饱和鲎C因子的水溶液加入到待测液体中，得到一混合液，待测液体中的内毒素能够激活所述鲎C因子，产生活性鲎C因子；

步骤2)将经过修饰的电极插入到所述混合液中，电极表面与所述活性鲎C因子发生酶切反应，电极表面的电化学性质被改变；随后取出电极，插入到另一含电化学活性物质的电解液中，测该电极对所述电解液的电化学响应值；

步骤3)配制至少三个含特定浓度的内毒素标准液，按照步骤1)和2)进行操作后得到相应的至少三组电化学响应值，并将所得电化学响应值绘成标准曲线；将步骤2)中所得电化学响应值与所述标准曲线进行比对，从而得出所述待测液体的内毒素含量；

其特征在于，步骤1)中所用鲎C因子是采用基因重组的方法制得。

2.根据权利要求1所述的检测液体中内毒素含量的方法，其特征在于，步骤1)中所用鲎C因子是采用以下方法制得：从鲎的血液中提取出RNA，逆转录出鲎C因子的DNA，在原核表达系统或真核表达系统中重组表达出鲎C因子，并对重组表达出的鲎C因子进行纯化。

3.根据权利要求2所述的检测液体中内毒素含量的方法，其特征在于，重组表达出的鲎C因子采用透析法、超滤法、盐析法、密度梯度离心法、电泳法、离子交换层析法、亲和层析法或低温有机溶剂沉淀法中的任意一种方法进行纯化。

4.根据权利要求1所述的检测液体中内毒素含量的方法，其特征在于，步骤2)中所用电极在插入到所述混合液之前，电极表面修饰有包含鲎三肽的多肽序列。

5.根据权利要求4所述的检测液体中内毒素含量的方法，其特征在于，所述多肽序列所含氨基酸数量为5～50个；所述多肽序列配成溶液修饰到电极表面上，所述多肽序列的浓度为0.1μM～100mM；修饰电极的方法采用吸附固定法、共价键合法或交联法中的任意一种。

6.根据权利要求1所述的检测液体中内毒素含量的方法，其特征在于，所述电极为金电极或碳电极。

7.根据权利要求1所述的检测液体中内毒素含量的方法，其特征在于，所述电解液中电化学活性物质选自铁氰化钾、亚铁氰化钾、钌或其配合物、吩恶嗪衍生物或具有电化学性质的纳米材料中的任意一种，所述电解液中电化学活性物质的浓度为0.1mM～100mM。

8.根据权利要求7所述的检测液体中内毒素含量的方法，其特征在于，测试电化学响应所用方法选自循环伏安法、计时电量法或示差脉冲伏安法中的任意一种。

9.根据权利要求1～8中任何一项所述的检测液体中内毒素含量的方法，其特征在于，所述电极表面的反应温度为37.0±1℃，所述酶切反应的反应时间为10min～3h。