[发明专利]一种迟缓爱德华氏菌亚单位疫苗及其制备与应用

权利要求书

1.一种迟缓爱德华氏菌亚单位疫苗，其特征在于：疫苗蛋白基因具有序列表SEQ ID No.1中的碱基序列。

2.按权利要求1所述的迟缓爱德华氏菌亚单位疫苗，其特征在于：疫苗蛋白基因编码蛋白为具有序列表SEQ ID No.2中的氨基酸序列。

3.一种按权利要求1所述的迟缓爱德华氏菌亚单位疫苗的制备,其特征在于：

1）质粒pETD的构建：以迟缓爱德华氏菌LSE40的基因组DNA为模板，用引物EDF和EDR进行PCR扩增，产物纯化后用BamHI/HindIII双酶切，回收579bp片断；同时将质粒pET30用BamHI/HindIII双酶切，回收5.4kb片断；将上述回收的两个DNA片断用T₄DNA连接酶连接，连接液转化感受态大肠杆菌DH5α后涂布含卡那霉素的LB固体培养基，筛选转化子提取质粒，即为质粒pETB；

所述引物为：EDF：5’-GCGCGGATCCGACGACTATCGACAGCGGCAG-3’和EDR：5’-GCGCAAGCTTGGACATGCGTACGCTGCT-3’；

2）疫苗蛋白的诱导表达和纯化：将质粒pETD转化感受态大肠杆菌BL21(DE3)，筛选得到携带pETD的菌株BL21/pETD；将BL21/pETD在含卡那霉素的LB液体培养基于37℃培养12-16小时，所得培养液按体积比1:100的比例转接新鲜的LB液体培养基，于37℃培养OD₆₀₀至0.5-0.8，加入IPTG至终浓度为1mmol，并继续培养3-5小时，离心收集菌体并悬浮于PBS中，用超声波裂解菌液至澄清；将裂解液离心并回收上清；将上清液用凝胶柱回收，即得具有序列表SEQ ID No.1碱基序列编码的氨基酸序列的亚单位疫苗蛋白。

4.按权利要求3所述的迟缓爱德华氏菌亚单位疫苗的制备，其特征在于：将上述所得的亚单位疫苗蛋白在PBS稀释至200-300μg/ml，之后将稀释的疫苗蛋白与油乳佐剂等体积混合。

5.一种权利要求1所述的迟缓爱德华氏菌亚单位疫苗的应用，其特征在于：所述疫苗用于制备抵抗迟缓爱德华氏菌侵染的疫苗。