[发明专利]一种催化碳-氟和碳-氯键形成的卤化酶无效
| 申请号： | 201310710496.7 | 申请日： | 2013-12-20 |
| 公开（公告）号： | CN103695384A | 公开（公告）日： | 2014-04-02 |
| 发明（设计）人： | 瞿旭东;王娅娅;邓子新 | 申请（专利权）人： | 武汉大学 |
| 主分类号： | C12N9/10 | 分类号： | C12N9/10;C12N15/54;C12P19/40 |
| 代理公司： | 武汉科皓知识产权代理事务所(特殊普通合伙) 42222 | 代理人： | 汪俊锋 |
| 地址： | 430072 湖*** | 国省代码： | 湖北;42 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 催化 形成 卤化 | ||
【权利要求书】：
1.一种卤化酶基因，核苷酸序列如SEQ ID No 2所示。
2.一种卤化酶，氨基酸序列如SEQ ID No 3所示。
3.权利要求2所述的卤化酶在催化F-和SAM形成5’-FDA上的应用。
4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，反应体系pH为6.5。
5.权利要求2所述的卤化酶和氨基氧化酶在催化氯离子和SAM形成5’-ClDA上的应用。
6.权利要求2所述卤化酶的制备方法，其特征在于：
首先，以来源于巴西诺卡菌的卤化酶基因为原始基因，根据卤化酶基因在大肠杆菌体内表达的密码子偏好，进行优化，合成以大肠杆菌为表达宿主的优化卤化酶基因序列；
其次，将优化卤化酶基因序列重组到克隆载体pUC57 simple，经NdeI和HindⅢ双酶切之后，连接到具有同样内切酶位点的表达载体pET28a(+)片段上，获得表达载体pWHU2401；
最后，将表达载体pWHU2401转化大肠杆菌感受态细胞，获得能够异源表达卤化酶的工程菌，放大发酵，纯化，从而获得卤化酶。
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