[发明专利]一种针对镰刀菌的多重PCR检测的引物及其应用

权利要求书

1.一种针对镰刀菌的多重PCR检测的引物，其特征在于：多重PCR检测的引物由三组引物对组成，它们分别是序列号为SEQ ID No.1的Fg-F和序列号为SEQ ID No.2的Fg-R，序列号为SEQ ID No.3的Fv-F和序列号为SEQ ID No.4的Fv-R，以及序列号为SEQ ID No.5的Fp-F和序列号为SEQ ID No.6的Fp-R。

2.一种如权利要求1所述多重PCR检测的引物在针对禾谷镰刀菌（F. Graminearum）、轮枝镰刀菌（F. Verticillioide）和层出镰刀菌（F. Proliferatum）检测中的应用。

3.如权利要求2所述的应用，其具体步骤为：

a) 提取待检测菌株的DNA；

b) 多重PCR扩增：以待检测菌株的DNA为模板进行多重PCR扩增；

多重PCR反应体系：10×PCR Buffer 2.5 μl，4.5U Taq酶、dNTPs 0.2 μM、MgCl₂ 2 mM、DNA模板2 μl、引物SEQ ID No.1、SEQ ID No.2、SEQ ID No.3、SEQ ID No.4、SEQ ID No.5和SEQ ID No.6各0.07 μM，最后加灭菌双蒸水至25μl；

多重PCR反应条件：94℃预变性5 min；94℃变性25 s、60℃退火25 s、72℃延伸25 s，共30个循环；72℃延伸10 min，10℃保存；

c）1.5%的琼脂糖凝胶电泳检测PCR扩增产物，经含有1%的EB染色液染色后，观测凝胶中DNA条带大小，扩增得到885-bp DNA条带为禾谷镰刀菌，扩增得到416-bp DNA条带为轮枝镰刀菌，扩增得到220-bp DNA条带为层出镰刀菌。