[发明专利]无抗生物发酵饲料及其制备方法

权利要求书

1.无抗生物发酵饲料的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

一、制备混合种液的步骤：

（1）、将发酵乳酸短杆菌，保藏编号为CCTCC NO:M 2013453，置于乳酸菌液体培养基中，在37℃条件下进行三级种子培养，培养至细胞浓度>10⁹CFU/mL，得发酵乳酸短杆菌的三级种子培养液；

（2）、将产朊假丝酵母，保藏编号为CCTCC NO:M 2013454，置于麦芽汁液体培养基中，在28℃条件下进行三级种子培养，培养至细胞浓度>10⁹CFU/mL，得产朊假丝酵母的三级种子培养液；

（3）、将发酵乳酸短杆菌的三级种子培养液与产朊假丝酵母的三级种子培养液按照体积比1：0.01～1的比例混合，得混合种子培养液；

（4）、将混合种子培养液按照体积比1：10的比例接种于混合种子培养基中，在28～30℃条件下进行培养，培养至细胞浓度>10⁹CFU/mL，得到混合种液；

二、制备混合发酵培养基的步骤：

（1）、将饲料原料烘干或压榨至含水量为25-35%，得到混合发酵培养基；

（2）、向混合发酵培养基中添加CaCO₃；

（3）、加水调节混合发酵培养基的湿度至50～60%；

（4）、自然pH值，灭菌后待用；

三、分段发酵步骤：

（1）、将混合种液按照体积比1:10的比例接种于混合发酵培养基中；

（2）、先在30～32℃条件下好氧发酵12h，然后在35～37℃条件下厌氧发酵48～72h，当混合物pH下降至3.5～4.0的稳定状态，且菌体数目达到10⁷～10⁸CFU/g时，停止发酵；

（3）、发酵物在40～62℃条件下烘干，包装得到成品。

2.根据权利要求1所述的无抗生物发酵饲料的制备方法，其特征在于，所述乳酸菌液体培养基的配制如下：

3.根据权利要求1所述的无抗生物发酵饲料的制备方法，其特征在于，所述麦芽汁液体培养基的配制如下：

将未加酒花的发酵啤酒的原料，稀释至12白利度，于666.4KPa压力下灭菌30min。

4.根据权利要求1所述的无抗生物发酵饲料的制备方法，其特征在于，所述混合种子培养基的配制如下：

玉米淀粉 5g   尿素 1g

CaHPO₄ 0.5g   蒸馏水稀释至 100mL

自然pH值     666.4KPa压力下灭菌30min。

5.根据权利要求1所述的无抗生物发酵饲料的制备方法，其特征在于，所述三级种子培养的步骤为：

（1）、将发酵乳酸短杆菌/产朊假丝酵母接种于5mL乳酸菌液体培养基/麦芽汁液体培养基中，培养16h，得一级种子培养液；

（2）、将5mL一级种子培养液接种于100mL乳酸菌液体培养基/麦芽汁液体培养基中，培养16h，培养至细胞浓度>10⁹CFU/mL，得二级种子培养液；

（3）、将100mL二级种子培养液接种于10L乳酸菌液体培养基/麦芽汁液体培养基中，培养16h，培养至细胞浓度>10⁹CFU/mL，得发酵乳酸短杆菌/产朊假丝酵母的三级种子培养液。

6.根据权利要求1所述的无抗生物发酵饲料的制备方法，其特征在于，所述发酵乳酸短杆菌的三级种子培养液与产朊假丝酵母的三级种子培养液按照体积比1：0.1的比例混合。

7.根据权利要求1所述的无抗生物发酵饲料的制备方法，其特征在于，所述混合发酵培养基中还添加有CaHPO₄、饲用矿物添加剂和饲用维生素中的任意一种，或任意两种的混合物，或三种同时添加。

8.根据权利要求7所述的无抗生物发酵饲料的制备方法，其特征在于，所述饲用矿物添加剂的原料组成及重量配比如下：

9.根据权利要求1所述的无抗生物发酵饲料的制备方法，其特征在于，所述混合发酵培养基的灭菌方法为：105℃蒸汽间歇式灭菌2～3次，每次1h，每次间歇3～4h。

10.一种无抗生物发酵饲料，其特征在于，由权利要求1至9任意一项所述的方法制备而来。