[发明专利]一种检测17β-雌二醇的电化学免疫传感器的制备方法及应用

权利要求书

1.本文发明的技术方案，包括以下步骤：

1、检测17β-雌二醇的电化学免疫传感器的制备步骤如下：

(1)石墨烯-聚苯胺的制备：

25 mg的GO溶于50 ml 1 mol/L H₂SO₄中，超声1 h，形成分散均匀的溶液；加入200 μL的苯胺单体再超声30 min；加入0.06 g的(NH4)₂S₄O₈，20 ℃超声2 h；得到的复合物通过过滤收集，60℃干燥；

(2) 抗体和辣根过氧化物酶标记层的制备：

 2 ml 1%的H₂PtCl₆·6H₂O加入到8 ml 水中，80℃搅拌状态下加入1%的硼氢化钠溶液，搅拌4 h，得到PtNPs；5.0 mg的多巴胺加入到5.0 ml PtNPs溶液中，用Tris–HCl将pH 调节至8.5，室温下搅拌5 h；离心用水清洗三次，得到多巴胺功能化的PtNPs；在将其加入到含有20 mg柠檬酸钠的HAuCl₄溶液中，室温下搅拌两个小时；离心清洗得到PDA-PtNPs-AuNPs纳米材料，溶于5 ml水中备用；100 μL，1mg/mL的辣根过氧化物酶 (HRP) 和100 μL，5 μg/mL的雌二醇抗体 (Ab)加入到2 ml的上述材料中，4℃下搅拌一夜；用PBS缓冲溶液清洗三次，得到纳米复合物标记层PDA-PtNPs-AuNP-HRP-Ab；

(3) 检测17β-雌二醇的电化学免疫传感器的制备步骤如下：

5 mg GO-PANI超声1h溶于5 mL DMF中，滴加20 μL的GO-PANI溶液在玻碳电极表面，室温下晾干；将修饰的电极浸在含有1 mM HAuCl₄ and 1 mM H₂PtCl₆的0.2 M的Na₂SO₄溶液中，通过恒电位方法进行扫描还原，扫描电位为-0.2 V，扫描时间是300 s；这样在GO-PANI表面修饰了一成Au-PtNPs的纳米合金；滴加10 μl，10 μg/mL的17β-雌二醇完全抗原在修饰好的电极表面，室温下干燥5 h；用10 μl BSA (1%)封闭的基本面残余的活性位点；每一步修饰后用PBS缓冲溶液曲线电极；得到制备的免疫传感器电极，4℃储存备用。

2.如权利要求1所述的一种检测17β-雌二醇的电化学免疫传感器，用于检测17β-雌二醇的步骤如下：

(1) 滴加10 μl抗体标记层和10 μl游离的17β-雌二醇标准品在制备的电极表面，室温下培养30 min，用PBS缓冲溶液冲洗未结合的抗体和标准品；

(2) 以Ag/AgCl电极为参比电极，铂丝电极为对比电极，制备的电极为工作电极，在含有8 mmol/L H₂O₂的PBS溶液中进行循环法扫描，扫描电压是-0.4 V至0.6 V，扫描速率是50 mV/s；根据添加H₂O₂前后的的信号变化和17β-雌二醇标准品浓度之间的关系，绘制标准曲线；

(3) 将待测样品代替17β-雌二醇标准品，根据标准曲线进行检测。