[发明专利]抗禽流感H5N1血凝素抗原的人源化抗体及其制备方法和用途

权利要求书

1.一种抗禽流感H5N1病毒血凝素抗原的人源化抗体，该抗体特异性结合禽流感H5N1抗原，其特征在于，所述人源化抗体的重链可变区具有SEQ ID No.1所示的氨基酸序列；所述人源化抗体的轻链可变区具有SEQ ID No.2所示的氨基酸序列。

2.如权利要求1所述的人源化抗体，其特征在于，所述人源化抗体的重链抗原互补决定区具有SEQ ID NO：5，SEQ ID NO：6及SEQ ID NO：7的氨基酸序列；所述人源化抗体的轻链抗原互补决定区具有SEQ ID NO：8，SEQ ID NO：9及SEQ ID NO：10的氨基酸序列。

3.一种权利要求1所述的人源化抗体的改造方法，其特征在于，包括如下步骤：

步骤1，基于目标抗体的可变区序列和结构信息的人源抗体模板的选择：将需人源化的鼠源目标抗体mH5M9轻、重链可变区的序列通过序列相似性搜索，选择与轻、重链相似性最高的人源抗体作为候选的人源化模板；

步骤2，抗原结合区的移植：将鼠源目标抗体mH5M9的互补决定区CDR移植到人源化模板抗体相应位置上，得到最初人源抗体A1；

步骤3，框架区残基回复突变位点的选择：基于模拟的mH5M9结构，采用计算生物学方法，对一些重要的框架区残基进行突变方向的筛选，最初人源抗体A1的重链可变区VH的第37、66、71和109位残基，被选择需突变为目标抗体上的相应残基，即第37位残基缬氨酸被甲硫氨酸代替，第66位残基赖氨酸被精氨酸代替，第71位丝氨酸被缬氨酸代替；第109位残基亮氨酸被缬氨酸代替，最终得到人源化抗体hH5M9。

4.一种编码权利要求1所述人源化抗体的DNA分子或基因，其特征在于，其重链可变区具有SEQ ID NO：3所示的核苷酸序列，轻链可变区具有SEQ ID NO：4的核苷酸序列。

5.一种表达载体，其特征在于，含有权利要求4所述的基因序列。

6.一种宿主细胞，其特征在于，它由权利要求5所述的表达载体转化而成。

7.一种如权利要求1所述的人源化抗体的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

步骤1，提供一种表达载体，该表达载体含有权利要求4所述的基因序列；

步骤2，用步骤1所述的表达载体转化宿主细胞；

步骤3，在适合所述抗体表达的条件下培养步骤2所得的宿主细胞；

步骤4，分离纯化获得所述的抗体。

8.如权利要求1所述的人源性抗体在制备血凝抑制禽流感H5N1病毒的药物中的应用。

9.如权利要求1所述的人源性抗体在制备对禽流感H5N1的HA抗原多种亚型具有高亲和力和中和活性的试剂中的应用。

10.如权利要求1所述的人源性抗体在鉴定识别HA抗原表位中的应用。

11.一种在H5型流感病毒中具有高度保守性的HA抗原表位肽序列，其特征在于，该HA抗原表位肽序列为如下氨基酸序列：KPNDAINF，如SEQ ID NO：11所示。