[发明专利]一种转录组测序方法在审
| 申请号： | 201310690135.0 | 申请日： | 2013-12-17 |
| 公开（公告）号： | CN104711340A | 公开（公告）日： | 2015-06-17 |
| 发明（设计）人： | 黄岩谊;汤富酬;范小英;张先念 | 申请（专利权）人： | 北京大学 |
| 主分类号： | C12Q1/68 | 分类号： | C12Q1/68 |
| 代理公司： | 无 | 代理人： | 无 |
| 地址： | 100871*** | 国省代码： | 北京;11 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 转录 组测序 方法 | ||
1.一种转录组测序方法，其特征在于，在RNA到cDNA的逆转录过程中所使用的引物包含随机序列和特定序列，随机序列位于特定序列的3’端，二者之间有0-5个碱基，随机序列由4-12个随机碱基组成，特定序列为5-30个碱基的同聚体，特定序列的碱基选自A、G、C、T中任意一个。
2.根据权利要求1所述的转录组测序方法，其特征在于，随机序列由6-8个随机碱基组成，特定序列为10-20个碱基的同聚体。
3.根据权利要求1所述的转录组测序方法，其特征在于，特定序列为15个碱基的同聚体，特定序列的碱基为T。
4.根据权利要求1所述的转录组测序方法，其特征在于，无需去除核糖体RNA。
5.根据权利要求1所述的转录组测序方法，其特征在于，所述的引物还包括锚定序列，锚定序列为cDNA扩增步骤中PCR引物序列。
6.根据权利要求1所述的转录组测序方法，其特征在于，所述转录组可以来自少量细胞，细胞个数为1-10000个，优选1-100个，更优选1-10个。
7.根据权利要求1所述的转录组测序方法，其特征在于，所述转录组所包含的RNA起始量为0.1pg-100ng，优选10pg-500pg。
8.根据权利要求1所述的转录组测序方法，其特征在于，在逆转录之前进行加热，加热的温度为60-80℃，加热的时间为10s-3min，优选30s-120s，更优选90s。
9.根据权利要求1-8任一项所述的转录组测序方法，其特征在于，该方法包括如下步骤：(1)加热，(2)逆转录反应获得cDNA一链，(3)消化未反应的引物，(4)一链cDNA加polyA尾，(5)二链cDNA合成，(6)cDNA模板扩增反应，(7)扩增产物的纯化，(8)扩增cDNA片段的筛选，(9)二轮扩增，(10)二轮扩增产物纯化及片段筛选，(11)cDNA文库构建及测序。
10.根据权利要求9所述的转录组测序方法，其特征在于，一链cDNA加poly(A)尾的过程中，加入dATP和ddATP。
11.根据权利要求10所述的转录组测序方法，其特征在于，所加入的dATP和ddATP的摩尔比为50-200：1，优选为100：1。
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