[发明专利]一株高产1,3-丙二醇的微生物有效
申请号: | 201310688092.2 | 申请日: | 2013-12-16 |
公开(公告)号: | CN103740609A | 公开(公告)日: | 2014-04-23 |
发明(设计)人: | 刘德华;欧先金;孙燕 | 申请(专利权)人: | 清华大学 |
主分类号: | C12N1/20 | 分类号: | C12N1/20;C12P7/18;C12M1/00;C12M1/34;C12R1/22 |
代理公司: | 北京清亦华知识产权代理事务所(普通合伙) 11201 | 代理人: | 李志东 |
地址: | 100084 北京*** | 国省代码: | 北京;11 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 高产 丙二醇 微生物 | ||
技术领域
本发明涉及微生物发酵技术领域,具体涉及一株高产1,3-丙二醇的微生物,更具体地,本发明涉及分离的微生物、生产PDO的方法及系统。
背景技术
1,3-丙二醇(PDO)作为一种典型的二醇化合物,被广泛地应用于润滑剂、染料、油墨、防冻剂、溶剂和制药工业等行业,还可合成聚氨酯等聚合物。但是因生产成本问题,其使用规模还较小。
PDO生产方法可分为化学合成法和微生物发酵法。化学法路线是化工原料经过一系列化学催化反应最终合成PDO;生物法是指微生物利用可再生的原料甘油或者葡萄糖合成PDO。相对化学法工艺路线,微生物发酵法具有原料可再生、污染小和成本低等优点,故成为现在PDO的主要生产方法。但是,自然界中能够利用甘油为底物合成PDO的微生物,其发酵性能均较差,生产强度较低。其中,克雷伯氏菌属,尤其是克雷伯肺炎杆菌(Klebsiella pneumoniae)是其中PDO发酵性较好的。通常,野生的克雷伯肺炎杆菌(Klebsiella pneumoniae)发酵甘油生产PDO性能较低,不能满足于现代工业生产的需求。
因而,目前分离筛选PDO发酵性能好、生产强度高的克雷伯肺炎杆菌,以及利用其生产PDO方面的研究,意义重大。
发明内容
本发明旨在至少解决现有技术中存在的技术问题之一。为此,本发明的一个目的在于提出一种本发明分离筛选获得的PDO发酵性能好、生产强度高的克雷伯肺炎杆菌。另一个目的在于提出一种利用克雷伯肺炎杆菌高效生产PDO的方法和系统。
根据本发明的一个方面,本发明提供了一种分离的微生物,其于2013年7月11日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心,保藏号CGMCC NO.7824,保藏名称为ACR30。根据本发明的实施例,该分离的微生物为克雷伯肺炎杆菌。
需要说明的是,普通克雷伯肺炎杆菌具有较厚的细胞荚膜,这容易导致发酵液粘度较大,从而增加发酵液后处理的难度,同时荚膜还是导致微生物致病性的主要因素之一,较厚的细胞荚膜更易致病。而发明人惊奇地发现,本发明分离筛选获得的上述克雷伯肺炎杆菌,荚膜较薄,利用甘油发酵生产PDO的性能好、生产强度非常高。
根据本发明的又一方面,本发明还提供了一种生产PDO的方法。根据本发明的实施例,该方法包括:于37摄氏度,150rpm条件下,利用种子培养基将本发明分离的微生物进行培养12小时,以便获得种子培养液;以及于37摄氏度,150-250rpm,空气0.5vvm条件下,利用发酵培养基将所述种子培养液进行发酵培养,并使发酵液的pH保持为6.8,以便生产所述PDO,其中,1L所述种子培养基中包含:2g硫酸铵;6.9g三水磷酸氢二钾;2.5g磷酸二氢钾;0.2g硫酸镁;1g酵母粉;30g甘油;2.0mL微量元素溶液;以及1.0mL铁溶液,1L所述发酵培养基中包含:4g硫酸铵;0.69g三水磷酸氢二钾;0.25g磷酸二氢钾;0.2g硫酸镁;1.5g酵母粉;30g甘油;1.5mL微量元素溶液;以及1.5mL铁溶液,每100mL种子培养基中接入所述分离的微生物的斜面菌苔1~5环,所述种子培养液与所述发酵培养基的体积比为1:100。发明人发现,利用本发明上述分离筛选获得的克雷伯肺炎杆菌,通过本发明的方法,能够高效地生产PDO,并且该方法简单易操作、成本低、生产效率高、污染少、发酵液粘度低、后续处理难度小。
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