[发明专利]大豆北方茎溃疡病菌的检测靶标及其LAMP引物组合物和应用

权利要求书

1.大豆北方茎溃疡病菌的检测靶标序列Tef，其特征在于核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。

2.SEQ ID NO.1所示的大豆北方茎溃疡病菌的检测靶标序列Tef在检测或鉴定大豆北方茎溃疡病菌中的应用。

3.针对权利要求1所述的大豆北方茎溃疡病菌的检测靶标序列Tef设计的特异性的LAMP引物组合物，其特征在于正向内引物FIP如SEQ ID NO.2所示，反向内引物BIP如SEQ ID NO.3所示，正向外引物F3如SEQ ID NO.4所示，反向外引物B3如SEQ ID NO.5所示。

4.根据权利要求3所述的特异性的LAMP引物组合物，其特征在于还包含正向环引物LF如SEQ ID NO.6所示，反向环引物LB如SEQ ID NO.7所示。

5.权利要求3或4所述的针对权利要求1所述的LAMP引物组合物在制备检测或鉴定大豆北方茎溃疡病菌的试剂中的应用。

6.一种用于检测大豆北方茎溃疡病菌的LAMP检测试剂盒，其特征在于包含权利要求3或4所述的特异性的LAMP引物组合物。

7.根据权利要求5所述的用于检测大豆北方茎溃疡病菌的LAMP检测试剂盒，其特征在于所述的试剂盒包含：由20mM正向内引物FIP、20mM反向内引物BIP，10mM正向外引物F3、10mM反向外引物B3，10mM正向环引物LF、10mM反向环引物LR，9.26%10xThermoPol Reaction Buffer、50mM MgSO₄、10mM dNTP Mixture、5M甜菜碱、8000U/mL Bst DNA Polymerase Large fragment及超纯水组成的检测溶液。

8.一种检测大豆北方茎溃疡病菌的方法，其特征在于提取待检微生物的DNA，以提取的DNA为模板，利用权利要求3或4所述的特异性的LAMP引物组合物进行LAMP扩增反应；扩增产物加入SYBR GREENⅠ染料，在常光和/或紫外光下检测，如果反应产物在常光下变显黄色、在紫外光下产生强烈荧光，则表示存在大豆北方茎溃疡病菌；如果反应产物在常光下显橙色、紫外光下无荧光产生则表示不含该病菌。

9.根据权利要求8所述的检测大豆北方茎溃疡病菌的方法，其特征在于提取待检微生物的DNA，取3μl DNA溶液，加入21.5μl权利要求7所述的检测溶液和2.5μl灭菌去离子水进行LAMP反应，反应程序为：64℃70min；增产物加入SYBR GREEN Ⅰ染料，在紫外光下检测结果，如果反应产物产生强烈荧光，则表示存在大豆北方茎溃疡病菌，无荧光产生则表示不含该病菌。