[发明专利]流感病毒裂解疫苗的纯化方法

权利要求书

1.一种流感病毒裂解疫苗的纯化方法，其特征在于，将流感病毒株接种鸡胚，经培养收获病毒液，病毒液经灭活后进行超滤浓缩，所得超滤液用KII连续流离心机进行蔗糖密度梯度离心，得到超离液，对超离液进行超滤透析去除蔗糖后进行分子筛凝胶层析，获得的病毒纯化液用裂解剂TritonX-100和去氧胆酸钠进行病毒裂解，裂解结束后，通过超滤透析去除裂解剂，获得的裂解液离心去除杂蛋白，收集上清经过滤除菌后，即得纯化的流感病毒裂解疫苗原液。

2.根据权利要求1所述的纯化方法，其特征在于，病毒液经灭活后经300-700KD膜包超滤浓缩。

3.根据权利要求1所述的纯化方法，其特征在于，进行蔗糖密度梯度离心使用的蔗糖浓度为45%-60%。

4.根据权利要求1所述的纯化方法，其特征在于，超离液经100KD膜包超滤透析去除蔗糖，透析使用的缓冲液为0.01mol/L PBS液。

5.根据权利要求1所述的纯化方法，其特征在于，进行分子筛凝胶层析使用的凝胶为Sehparose4Fast Flow；洗脱液为0.01mol/L PBS液，洗脱速度为0.3-0.8cm/min，上样量为柱体积的2%-8%。

6.根据权利要求1所述的纯化方法，其特征在于，向病毒纯化液中加入裂解剂TritonX-100和去氧胆酸钠进行病毒裂解，二者浓度为0.2%-1.0%。

7.根据权利要求1所述的纯化方法，其特征在于，病毒裂解的条件为：18℃-26℃，裂解30-120min。

8.根据权利要求1所述的纯化方法，其特征在于，裂解结束后，用0.01mol/L PBS缓冲液进行超滤透析去除裂解剂，透析体积为裂解液体积的40-70倍。

9.根据权利要求1所述的纯化方法，其特征在于，获得的裂解液以2000-10000g离心1-4h去除杂蛋白。