[发明专利]巨大芽孢杆菌同化硝酸还原酶和亚硝酸还原酶基因及应用

权利要求书

1.一种编码同化硝酸盐还原酶Nas的催化亚基nasC，其特征在于，其氨基酸序列如Seq ID No.1所示，由716个氨基酸组成。

2.一种编码同化亚酸盐还原酶NiR的大亚基nasD，其特征在于，其氨基酸序列如Seq ID No.2所示，由804个氨基酸组成。

3.一种基因功能表达方法，其特征在于，通过从巨大芽孢杆菌NCT-2中提取得到总RNA后进行cDNA合成，得到cDNA模板后经荧光定量PCR实现功能表达；

所述的基因是指：编码同化硝酸盐还原酶Nas的催化亚基nasC以及编码同化亚酸盐还原酶NiR的大亚基nasD。

4.根据权利要求3所述的方法，其特征是，所述的荧光定量PCR是指：采用TaKaRa公司的SYBR Green I荧光定量PCR试剂盒和ABI公司的StepOne^TM荧光定量PCR仪进行荧光实时反转录定量PCR。

5.根据权利要求4所述的方法，其特征是，所述的定量PCR的内标基因为16S rRNA。

6.根据权利要求4或5所述的方法，其特征是，所述的PCR的引物序列包括：

①nasC荧光定量RT-PCR用的引物序列为：

正向引物序列：5’-CGGCGAAATCAAACACGA-3’和反向引物序列：5’-TAATCCGCGATCCCTCCT-3’；

②nasD荧光定量RT-PCR用的引物序列为：

正向引物序列：5’-TTCTTCC GATTCCAGGGTC-3’和反向引物序列：5’-AGTCCGCCTCCAATAACC-3’；

③内标基因16S rRNA所用引物序列为：

正向引物序列：5’-CCTTACCAGG TCTTGACATCC-3’和反向引物序列：5’-CCTTAGAGTGCCCAACTGAAT-3’。

7.一种基于巨大芽孢杆菌NCT-2的基因应用，其特征在于，将其用于从土壤中去除硝酸盐；

所述的基因是指：编码同化硝酸盐还原酶Nas的催化亚基nasC以及编码同化亚酸盐还原酶NiR的大亚基nasD。