[发明专利]一种林可霉素化学发光酶联免疫快速检测试剂盒

说明书

技术领域

本发明涉及一种检测试剂盒，具体的说是一种林可霉素化学发光酶联免疫快速检测试剂盒。 

背景技术

目前检测牛乳中林可霉素抗生素残留的技术主要有以下几种方法： 

（1）微生物受阻检测法，又称微生物抑制实验(micmorganism inhibitory test，简称MIT)，据抗生素对特异微生物的生理机能、繁殖代谢的抑制作用来定性或定量确定样品中抗微生物药物残留量，是检测乳中抗生素较经典且应用较广泛的方法。我国鲜乳中抗生素残留检验标准（GB4789.27-2003）检测法，七、八十年代国外普遍采用的抑菌圈试验、浑浊度试验，还有目前市场上销售的变色型检测试剂盒均属此类。不同种类指示菌对不同种类抗生素敏感程度不同，选择适当的检测指示菌可以降低检测限，提高检测灵敏度。但是，微生物检测操作费时费力，不适合做大规模的生产。

（2）理化检测法 

20世纪90年代以后，绝大多数测定食品中林可霉素类药物残留的理化检测法主要依靠液相色谱技术进行分离，其次是色／质谱联用技术，气相色谱法、高效薄层色谱法等检测法，因其各自特有的性能，在抗生素残留检测方面稍有应用。色谱法检测牛乳中的药物残留要经过样品处理(包括样品的提取、脱蛋白、离心、层析柱净化、衍生化等步骤)、残留药物的分离和残留药物的检测。理化检测法利用抗生素分子中的基团所具有的特殊反应或性质来测定其含量，能进行定性、定量分析和药物鉴定，可作为乳中抗生素检测的确证方法。该法检测敏感性较高，但仪器及检测费用高、检测程序复杂、较耗时间等，这些不利因素使该法仅限于实验室乳样测定。

（3）免疫学分析法 

免疫学分析法是以抗原与抗体的特异性、可逆性结合反应为基础的分析方法，目前药物残留免疫分析技术主要分三大类：相对独立的分析方法、免疫分析技术与常规理化分析技术联用的方法、免疫受体法。1973年荷兰van weeman、schurrs及瑞典Engvall、Perlmann分别提出酶联免疫吸附法，30多年来国内外学者对免疫学方法检测食品中抗生素进行了大量研究。但由于抗生素是半抗原，抗原构建技术难度大、免疫特异性强、检测成本高，目前IDEXX实验室公司、Cha瑚Sciences等公司在免分析法方面的研究较为成熟，国内该技术仍处于研究发展中。当前主要是用酶联免疫吸附试验、放射性免疫发光法、荧光免疫法、化学发光法等，比较几种标记免疫技术灵敏度的可知酶免与发光相比较，其酶免灵敏度较低。

发明内容

为了解决上述技术问题，本发明提供一种快速、灵敏度高的检测林可霉素的化学发光酶联免疫检测试剂盒，检测范围宽、操作简便快速、无毒无污染且所用仪器简单经济的检测林可霉素的化学发光酶联免疫分析测定试剂盒，同时提供了其制备方法，以及检测样品中林可霉素抗生素类的方法。 

本发明为解决上述问题所采用的技术方案为：一种林可霉素化学发光酶联免疫快速检测试剂盒，包括盒体、设在盒体内的酶标板和设在盒体内试剂，其特征在于：所述酶标板的各孔包被有包被抗原，其中包被抗原由林可霉素的代谢物与卵清蛋白偶联制成；所述试剂包括：林可霉素的单克隆抗体、酶标二抗即辣根过氧化酶标记的羊抗鼠的抗体、林可霉素系列标准溶液、浓缩磷酸盐缓冲液、浓缩洗涤液、发光液。 

所述酶标板为不透明的聚苯乙烯8孔×12条的96孔化学发光酶标板。 

所述包被抗原浓度为5μg/mL。 

所述林可霉素的单克隆抗体是由林可霉素的代谢物与分子量范围是6.7KDa~6.8 KDa的牛血清蛋白偶合制成的偶联物作为免疫原免疫小鼠制备得到的单克隆抗体，其工作浓度为1:15000。 

一种使用上述林可霉素化学发光酶联免疫快速检测试剂盒检测残留林可霉素抗生素的方法，包括以下步骤： 

1）加样：按照50μL/孔的加入量，向酶标板的孔中分别加入林可霉素系列标准浓度溶液和样品溶液，然后按照50μL/孔的加入量，向各孔中加入林可霉素抗体工作液，之后室温恒温孵育2.5h；

2）洗涤：倾出孔中液体，向酶标板中加入280μL/孔的洗涤液，静置5min后拍干，重复三次；

3）加酶标二抗：每孔加入酶标二抗工作液100μL，室温恒温孵育1.5h；

4）洗涤：倾出孔中液体，向酶标板中加入280μL/孔的洗涤液，静置5min后拍干，重复三次；

5）加发光液：每孔加入发光液100μL；