[发明专利]克隆苹果BKI1基因和苹果BKI1基因编码区序列的方法无效
| 申请号： | 201310672331.5 | 申请日： | 2013-12-07 |
| 公开（公告）号： | CN103642822A | 公开（公告）日： | 2014-03-19 |
| 发明（设计）人： | 马跃;张志宏;阎忠业;吕天星;刘志;王冬梅;张景娥;王丰;张蕾;代红艳;李贺;刘月学 | 申请（专利权）人： | 沈阳农业大学;辽宁省果树科学研究所 |
| 主分类号： | C12N15/29 | 分类号： | C12N15/29;C07K14/415;C12N15/10 |
| 代理公司： | 沈阳杰克知识产权代理有限公司 21207 | 代理人： | 金春华 |
| 地址： | 110866 辽*** | 国省代码： | 辽宁;21 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 克隆 苹果 bki1 基因 编码 序列 方法 | ||
1.苹果BKI1基因，其特征在于：其基因序列如SEQ ID NO:1所示。
2.根据权利要求1所述的苹果BKI1基因，其特征在于，所述苹果BKI1基因的编码区序列如SEQ ID NO:2所示。
3.根据权利要求2所述的苹果BKI1基因，其特征在于，所述苹果BKI1基因编码区序列的氨基酸序列如SEQ ID NO:3所示。
4.根据权利要求1、2或3所述的苹果BKI1基因，其特征在于：所述的苹果为“寒富”苹果。
5.权利要求1所述的苹果BKI1基因的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
1）提取苹果叶片中的总DNA；
2）提取苹果叶片中的总RNA，然后将总RNA反转录成cDNA；
3）分别以DNA和cDNA为模板，通过设计的特定引物，利用PCR方法扩增，得到PCR产物；
其中，所述的特定引物是：
上游引物P1:5’-ATGGAGTCGTCGAGGACGAG-3’；
下游引物P2:5’-TCAAATCTCATGACTGACCA-3’；
4）PCR产物经回收、纯化，克隆，测序分别得到DNA序列如SEQ ID NO:1所示的苹果BKI1基因序列及cDNA序列如SEQ ID NO:2所示的苹果BKI1基因编码区序列。
6.根据权利要求5所述的制备方法，其特征在于步骤3）中，PCR反应体系为：20μL体系：
PCR反应程序为：94℃ 3min；94℃ 30s，58℃ 1min，72℃ 1min，35个循环；72℃延伸10min。
7.根据权利要求5或6所述的制备方法，其特征在于：所述的苹果为“寒富”苹果。
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