[发明专利]一种含绿色荧光蛋白报告基因的植物表达载体及其构建方法和应用

权利要求书

1.一种含绿色荧光蛋白报告基因的植物表达载体，其特征在于：所述的植物表达载体是以pRI-AN-101载体为骨架载体，将GFP基因插入pRI-AN-101载体，得到重组载体pRI-AN-101-GFP，然后对GFP基因的NdeⅠ识别位点进行定点突变，得到含GFP基因的植物表达载体，命名为pRI101-GFP。

2.一种权利要求1所述的含绿色荧光蛋白报告基因的植物表达载体的构建方法，其特征在于包括以下步骤：

（1）GFP基因的获得；

（2）将GFP基因插入质粒pGM-T中，得重组质粒pGM-GFP；

（3）用EcoR I和SacI分别对pGM-GFP和pRI-AN-101载体进行双酶切，将二者连接得到重组载体pRI-AN-101-GFP；

（4）以重组载体pRI-AN-101-GFP为模板，以SEQ ID NO：4所示的NdeⅠ识别位定点突变第一条引物和SEQ ID NO：5所示的NdeⅠ识别位定点突变第二条引物作为引物，进行PCR扩增，得到突变载体pRI101-GFP。

3.如权利要求2所述的构建方法，其特征在于：步骤（1）GFP基因的获得方法如下：以pCXGFP-P载体质粒为模板，以SEQ ID NO：1所示的上游引物和SEQ ID NO：2所示的下游引物进行PCR扩增，得到GFP基因全长序列。

4.权利要求1所述的含绿色荧光蛋白报告基因的植物表达载体在双子叶植物遗传转化中的应用。

5.含山楂NAC domain基因的pRI101-GFP植物表达载体的构建，其特征在于包括以下步骤：

（1）山楂NAC domain基因的获得；

（2）将山楂NAC domain基因插入质粒pGM-T中，得重组质粒pGM-NAC domain；

（3）用Nde I和Kpn I分别对重组质粒pGM-NAC domain和权利要求1所述的pRI101-GFP载体进行双酶切，将二者连接，得到含山楂NAC domain基因序列全长的植物表达载体pRI101-GFP-NAC domain。