[发明专利]一种分离提取糜蛋白酶的方法无效
| 申请号： | 201310659581.5 | 申请日： | 2013-12-02 |
| 公开（公告）号： | CN103695404A | 公开（公告）日： | 2014-04-02 |
| 发明（设计）人： | 刘乃山;李静洁;刘君;刘振海;刘翠珍 | 申请（专利权）人： | 青岛康原药业有限公司 |
| 主分类号： | C12N9/76 | 分类号： | C12N9/76 |
| 代理公司： | 暂无信息 | 代理人： | 暂无信息 |
| 地址： | 266300 山东省青*** | 国省代码： | 山东;37 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 分离 提取 蛋白酶 方法 | ||
1.一种分离提取糜蛋白酶的方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)结晶；(2)活化；(3)盐析；(4)透析；(5)冻干。
2.权利要求1所述制备方法，其特征在于，各步骤具体为：
(1)结晶工序
糜蛋白酶粗品加水溶解，调pH值至2.5～3.5，静置8～12小时；
结晶：将糜蛋白酶粗品溶解液再调pH值至2.0～3.0；加入饱和硫酸铵溶液，调pH值至4.0～6.0，置25±3℃条件下，保温20～48小时，过滤，收集滤饼；
滤饼加水溶解，重复上述结晶操作3次，收集滤饼；
(2)活化工序
用水溶解上步中所得滤饼，调pH值至7.0～9.0；
加磷酸盐缓冲液，调pH值至7.0～9.0；加入活化剂，活化60～80小时；
(3)盐析工序
活化液调pH值至3.0～5.0，加入固体硫酸铵进行盐析，过滤，收集滤饼；
(4)透析工序
滤饼加水溶解，放透析袋，透析4～6天。
(5)冻干工序
收集、合并透析液，过滤，调节pH值至5.5～6.7，装盘、冻干。
3.根据权利要求2所述的一种分离提取糜蛋白酶的方法，其特征在于，所述步骤(1)中，饱和硫酸铵溶液与粗品溶液的体积比为1～3。
4.根据权利要求2所述的一种分离提取糜蛋白酶的方法，其特征在于，所述步骤(2)中加入活化剂的比例为3～8mg/100ml料液，活化60～80小时。
5.根据权利要求4所述的一种分离提取糜蛋白酶的方法，其特征在于，所述活化剂为胰蛋白酶。
6.根据权利要求2所述的一种分离提取糜蛋白酶的方法，其特征在于，所述步骤(3)中活化液按400～600g/L的比例加入固体硫酸铵进行盐析。
7.根据权利要求2所述的一种分离提取糜蛋白酶的方法，其特征在于，所述步骤(4)中，滤饼加水溶解的比例为1～1.5ml/g。
8.根据权利要求2所述的一种分离提取糜蛋白酶的方法，其特征在于，所述步骤(5)中冻干前pH调节为6.0～6.5。
9.一种糜蛋白酶，其特征在于，所述糜蛋白酶通过权利要求1-8任意之一的方法制备得到，其效价为1200～1500单位/毫克。
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