[发明专利]中药百合中酚酸甘油酯苷化合物的高速逆流色谱分离方法及应用

说明书

技术领域

本发明涉及中药百合中酚酸甘油酯苷化合物的分离方法，具体涉及一种以高速逆流色谱法从中药百合中分离制备酚酸甘油酯苷化合物的方法。

背景技术

百合（Liliaceae）是多年生草本植物，全世界约有百合90多种，我国约有46种18个变种，其中卷丹(Lilium lancifolium Thunb）、百合(Lilium brownii F.E.Brown var.viridulum Baker）或细叶百合(L.pumilum DC.）的干燥肉质鳞茎是我国药典中记载的药用品种，也是民间广泛药食同源植物，具有养阴清肺、清心安神之功。现有技术中一般通过硅胶反复柱层析、凝胶色谱及制备薄层色谱等多种联用技术从不同品种百合植物中分离出酚酸甘油酯苷、酚酸甘油酯、甾体皂苷、生物碱、甘油苷、黄酮等多种化学成分。但我国三个药用品种中的化学成分及其生物活性鲜有报导。

高速逆流色谱（HSCCC）是近年来发展的一种广泛用于天然产物分离制备的液-液分配色谱技术，具有操作简便、重现性好、制备量大的特点，广泛用于天然活性物质的制备。但以该高速逆流色谱法从中药百合分离制备酚酸甘油酯苷化合物的方法未见报导。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是：针对上述现有技术的不足，提供一种中药百合中酚酸甘油酯苷化合物的高速逆流色谱分离方法及应用。

为了解决上述技术问题，本发明所采用的技术方案是：一种中药百合中酚酸甘油酯苷化合物的高速逆流色谱分离方法，该方法步骤如下：

a.制备百合提取物：取百合粉，加入为5-10倍质量的质量浓度为40-60%的乙醇于50-70℃水浴浸提3次，每次0.5-1h，合并滤液，滤液减压浓缩至无醇味；将该提取液以1-3BV/h流速通过装有D101大孔吸附树脂的层析柱，吸附后静置0.5-1h，用蒸馏水以2-4BV/h流速淋洗除去杂质，再用70%质量浓度的乙醇以2-4BV/h流速洗至洗脱液无颜色，将乙醇洗脱液减压浓缩后冷冻干燥，即得百合提取物；

b.高速逆流色谱法分离：将乙酸乙酯、正丁醇和0.5%乙酸水溶液按体积比3:1.5:5组成高速逆流溶剂体系，充分混合，静置分层过夜，将上相与下相分离，上相为固定相，下相为流动相，超声脱气10-20min；将制得的百合提取物按每200mg-250mg加10-20mL下相的比例用下相溶解作为样品溶液，将上相溶剂以20mL/min的流速注入高速逆流色谱仪，待上相溶剂充满后，在800-900rpm/min的转速下将剩余下相以1.5-2mL/min的流速注入，检测波长为280nm，平衡后将样品溶液进样，80-100min后进行图谱采集（根据流速不同采集时间有所不同），根据峰形手动分段收集流出液，将收集的流出液减压浓缩后冷冻干燥，得粉末状化合物regaloside A、化合物Acetylregaloside C及化合物regaloside B。

上述百合粉是取新鲜中药百合于50-60℃烘箱中干燥至含水量为7-9%，粉碎至粒径为10-20目。该中药百合是指百合中的卷丹(Lilium lancifolium Thunb）、百合(Lilium brownii F.E.Brown var.viridulum Baker）和细叶百合(L.pumilum DC.）三个药用品种中的百合(Lilium brownii F.E.Brown var.viridulum Baker）。

本发明利用HSCCC技术从中药百合中制备分离得到3个化合物，该方法简便、高效，适宜化合物的大量制备；同时，对该3种化合物的抗氧化性及对淀粉酶活性的影响进行了研究，Regaloside A与Regaloside B对脂质过氧化具有一定的抑制作用；Acetylregaloside C对二者的作用均较强，且三种化合物对α-淀粉酶活性均具有一定的促进作用，显示中药百合可能具有消食的功能，为中药百合进一步药理研究及质量控制奠定基础。

附图说明

图1是百合提取液HPLC谱图。

图2是百合提取物采用HSCCC分离的色谱图和HSCCC分离的3个化合物的HPLC色谱图。

其中：A为HSCCC分离的色谱图；B-C为HPLC色谱图，B表示化合物1；C表示化合物2；D表示化合物3。

图3是3个化合物对淀粉酶的促进作用。

具体实施方式

以下实施例中用到的原料与仪器、及HPLC分析条件：