[发明专利]一种抗草甘膦转基因大豆LAMP快速检测方法及应用

权利要求书

1.一种抗草甘膦转基因大豆LAMP快速检测方法，其特征在于：其中LAMP反应体系所使用的引物是：

①F3：5’-TCCTCGACGGCCTTCC-3’;

②B3：5’-GCACCGTGACGCCCTT-3’;

③BIP：5’-CGAAGTCATCAACCCGCGCCAGCGTGGAGGAGCGAAC-3’;

④FIP：5’-TGGGGTTCATCAGCACGTTGAGTTGCGGCCCTGCTTGT-3’;

⑤LB：5’-GAAGACGTGGCGGACCT-3’;

⑥LF：5’-ATGGTGACGTCGGAGCC-3’。

2.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于：其中的LAMP反应体系包括：

1）引物混合液：外引物F3和B3各0.2μmol/L，内引物FIP和BIP各1.6μmol/L,环引物LB和LF各为0.4μmol/L；

2）反应混合液：6mmol/L dNTP,20mmol/L Tris-HCl(pH8.8),10mmol/L KCl,3mmol/L MgS0₄,10mmol/L(NH4)₂S0₄,0.1%Triton x-100,8U Bst DNA聚合酶大片段。

3.根据权利要求2所述方法，其中LAMP反应条件为：将引物混合液和反应混合液混合均匀后，加入1μl DNA模板后，加灭菌双蒸馏水补全到25μl，在反应体系配置完成后滴加20μl石蜡油，置于61～65℃温育30～90min，85℃保温2min。

4.根据权利要求3所述的方法，还包括LAMP反应后观察检测结果步骤，其特征在于：在LAMP反应后的体系中加入2μl显色剂SYBR green I，观察显色情况。

5.权利要求1-4所述任一检测方法在转基因大豆及其加工后的产品快速检测和田间转基因大豆基因漂移的监测中的应用。