[发明专利]用于检测菊黄东方鲀生长速度的引物对及方法

说明书

[技术领域]

本发明涉及菊黄东方鲀的检测引物和方法，具体涉及检测菊黄东方鲀生长速度的引物对及方法。

[背景技术]

菊黄东方鲀（Fugu flavidus）俗称艇巴、乖鱼、菊黄、满天星等，分类上隶属鲀形目(Tetraodontif-ormes)鲀科(Tetraodontidae)东方鲀属(Fugu)，主要分布于我国黄海、东海和渤海。由于其味道鲜美，营养丰富，颇受欢迎，是一种名贵的养殖种类。在养殖过程中，生长速度快的个体可以缩短养殖时间，提高饲料的利用率，节约养殖成本，因此培育筛选生长速度快菊黄东方鲀是水产养殖者追求的目标。目前在菊黄东方鲀中，与生长相关的分子标记研究是空白。

肌肉生长抑制因子（Myostatin,MSTN）最先从小鼠骨骼肌cDNA文库克隆到，它主要在肌肉组织中大量表达，属于TGF-β超级家族。对MSTN基因敲除小鼠地研究表明，突变小鼠的体重比杂合体和野生型小鼠体重增加约30%，其中肌细胞增生（hyperplasia）和肌纤维肥大（hypertrophy）双重作用所造成的肌肉肥大是造成体重增加的主要原因，并且这一特性与动物的性别及年龄无关，而且不影响动物的繁殖能力。因此，MSTN是肌肉生长的一个重要负调控主效基因。活化的MSTN与细胞膜表面受体（活化素受体蛋白II B（ACVR2B）和活化素受体蛋白IB（ACVRB））相结合，可以激活下游的S妈的2/3和p38MAPK细胞内信号传导途径，从而调节各组织的生长发育。

在《黄颡鱼MSTN基因多肽性及其与生长性状的相关分析》（朱媛媛等，遗传，2012年1月34（1）：72-78页）一文中，披露了MSTN对黄颡鱼生长速度的影响，通过转基因技术和DNAi技术抑制斑马鱼的MSTN基因发现实验鱼的肌肉明显比正常鱼发达，因此认为该基因在动物肌肉生长发育中起到重要抑制作用，也可能参与脂肪的生成和调节。在鱼类中，MSTN mDNA可以在肌肉，眼，脑、肠、腮、肾、心、脾中发现，并且在不同的鱼种中MSTN还分为两类，MSTN1、MSTN2（牙鲆肌肉生长抑制素(MSTN)基因克隆，徐建勇、陈松林，水产学报第32卷第4期，2008年7月，497-498）。

[发明内容]

为了弥补现有技术的空白，提供一种能够对于菊黄东方鲀生长速度进行检测的引物对。

菊黄东方鲀中存在可用于筛选生长相关的片段，该片段位于菊黄东方鲀MSTN2基因3端非翻译区域如序列SEQ ID NO：3及附图1所示。其中框里阴影部分为GT重复的微卫星核心区域。在菊黄东方鲀中存在染色体加倍现象，在扩增过程中，其他拷贝上的片段也会出现扩增现象。

在上述发现的基础上，发明一种检测菊黄东方鲀生长速度的引物对，该引物对由碱基序列为SEQ ID NO：1的上游引物和SEQ ID NO：2的下游引物组成。

本发明还包括一种检测菊黄东方鲀生长速度的方法，于由以下步骤组成，

提取样品菊黄东方鲀的肌肉生长抑制因子的DNA序列，

采用上述引物对作为PCR扩增的引物对样品进行PCR扩增；

将扩增产物进行PAGE、染色处理；

观察对比各个样品的条带，条带越多的个体生长速度越快。

上述方法还具有如下优化方案：

所述的PCR扩增的反应体系20μL，包括2ul 10×PCR缓冲液，0.8ul 10mmol/L的dNTP mix,0.4μmol/L的上游引物，0.4μmol/L的下游引物，30ng的样品菊黄东方鲀DNA。

所述的PCR扩增反应条件如下，94℃变性3分钟，然后94℃变性30秒，55℃复性30秒，及72℃延伸30秒，42个循环，最后72℃延伸10分钟。

通过本发明的引物对和检测方法，能够有效的对于不同个体的菊黄东方鲀的生长速度进行筛选，为人工育种提供有效的信息，筛选后能够得到生长速度块的个体养殖时间短，节约了养殖成本。并且其方法简单、速度快，能够广泛的用于各个地域。

[附图说明]

图1为菊黄东方鲀MSTN2基因中的微卫星核心区域示意图；

图2位不同样品菊黄东方鲀的PAGE条带对比图。

[具体实施方式]

下面通过具体实施例结合附图对本发明做进一步说明，下述实施例仅仅是为清楚地说明本发明所作的举例，而并非是对本发明的实施方式的限定。