[发明专利]一种竹节参皂苷及其制备方法与用途

说明书

【技术领域】

本发明属于疫苗佐剂技术领域。更具体地，本发明涉及一种用作疫苗佐剂的竹节参皂苷，还涉及所述竹节参皂苷的制备方法，还涉及所述竹节参皂苷的用途。

【背景技术】

竹节参系五加科人参属植物竹节参的干燥呈竹鞭状根茎，为我国的名贵特产少常用的中药材之一。竹节参多生长在海拔1000m以上的阔叶疏林阴湿地或岩石、沟涧旁边，对土壤条件要求较高，适宜在中性或微酸性环境中生长，喜腐殖质层厚、疏松肥沃、排水良好的沙壤土。在云南、贵州、四川、湖北、陕西、甘肃、河南、浙江、安徽、江西等省民间有较长的应用历史，还有少量出口香港。有滋补强壮，散瘀止痛，止血祛痰的功效，也是土家族著名民族药，一直被湖北恩施土家族先民奉为“草药之王”。随着现代药理学研究深入，竹节参的主要功效已经逐步地体现在某一类成分，甚至到某种成分上。竹节参的主要有效成分为竹节参皂苷和皂苷类。在现有技术中也记载了竹节参皂苷的制备方法，例如CN101732379A公开了D101大孔吸附树脂富集纯化竹节参总皂苷工艺，它只是介绍了提取工艺；CN102247416A公开了竹节参总皂苷的降血脂作用。未见报道竹节参皂苷用于疫苗佐剂。

目前，用于人用疫苗的佐剂为铝盐佐剂(主要是氢氧化铝及其磷酸盐，Alum)。铝盐佐剂作为人类疫苗佐剂已使用了几十年，成为人用疫苗中常用的佐剂，具有良好的佐剂效果。随着新型疫苗的不断出现，铝盐佐剂显现出一些问题，其中包括：(1)因其理化性质特点，铝盐疫苗冷冻后胶体状态被破坏，因此不能冷冻干燥和在低温状态下运输，但现在的很多多肽疫苗必须要低温保存。(2)因含盐量高，贮存日久有结晶沉淀，使制备的疫苗稳定性得不到保障。(3)铝盐对人、畜的神经系统可能有影响。(4)在注射部位有时会发生局部无菌性脓肿，甚至可以形成肉芽肿，轻度局部反应较为常见。(5)对肿瘤疫苗不适合，以铝盐佐剂作疫苗主要适用于以抗体为保护性免疫的疫苗。(6)铝盐佐剂释放抗原物质的速度缓慢，效应也比较弱，对许多可溶性抗原都不够有效，对抗原的要求比较高。因此研究新型疫苗佐剂是制备新型疫苗的重要环节。

从植物中提取皂苷可以激活哺乳动物的免疫系统，其免疫佐剂活性受到广泛关注。皂苷QS-21是最具代表性的物质，其研究已进入临床试验阶段。皂苷QS-21是南美的植物中提取物皂树皮皂苷(Quil A)的主要成分，研究表明其产生抗体应答持续保护时间要比铝盐佐剂长，因此可以作为铝盐佐剂替代物。但是，Quil A存在严重的毒性，对小鼠的致死量在100-125μg，除此还有严重的溶血性，在注射部位可引起肉芽肿和注射部位症状，所以限制了在人用疫苗中的使用。至今，从Quil A中分离得到23种单体化合物。皂昔QS-21对小鼠的致死剂量是500μg，毒性虽小于Quil A，但是它还是仅用于肿瘤疫苗中。而且，皂苷QS-21等分子结构中存在酷键结构影响了其稳定性。因而，人们越来越关注从其它植物中寻找具免疫佐剂活性且毒性相对较低的皂苷。

本发明竹节参皂苷制备方法对竹节参总皂苷进一步分离纯化，改进以往只用总皂苷成分并未对其主要成分进行研究的缺点，本发明正是以此为出发点，解决了经常困扰人们不清楚用药成分的问题；本发明方法制备得到的竹节参皂苷活性部位具有非常明显的免疫佐剂作用，为开发新型疫苗佐剂指明了方向。

【发明内容】

[要解决的技术问题]

本发明的目的是提供一种竹节参皂苷。

本发明的另一个目的是提供所述竹节参皂苷的制备方法。

本发明的另一个目的是提供所述竹节参皂苷的用途。

[技术方案]

本发明是通过下述技术方案实现的。

本发明涉及一种用作疫苗佐剂的竹节参皂苷的制备方法。

该制备方法包括如下步骤：

A、竹节参提取

将竹节参原料粉碎，按照竹节参与乙醇水溶液的重量比1：5～15，将粉碎竹节参浸泡在体积分数为55～85%乙醇水溶液中，浸泡2～5h，再加热回流提取2～5次，每次1～5h，合并提取液，再减压浓缩至提取液无醇味，得到一种浓缩液；

B、萃取分离

步骤A得到的浓缩液按照浓缩液与正丁醇的体积比1:1～4用正丁醇进行多次萃取与两相分离，直到正丁醇相无色，得到的正丁醇萃取液合并，接着减压浓缩，真空干燥，于是得到正丁醇萃取物；

C、树脂吸附