[发明专利]提高苏云芽孢杆菌产几丁质酶的培养基及培养方法

说明书

技术领域

本发明涉及生物技术领域，具体来说是一种提高苏云芽孢杆菌产几丁质酶的培养基及培养方法。

背景技术

苏云金芽胞杆菌（Bacillus thuringiensis，简称Bt）是一种革兰氏阳性菌，其在生长周期的稳定期形成的芽胞及伴胞晶体使其独具特性。由于苏云金芽胞杆菌制剂对靶标昆虫有特异性毒杀作用，且对人畜安全、不危害环境，在农业、林业和卫生害虫的防治上得到了广泛应用。

许多Bt 菌除了合成杀虫晶体蛋白外，也能产生几丁质酶。Bt几丁质酶不仅具有杀虫增效作用，对病原真菌也有抑制作用，具有防治农作物病虫害的作用；几丁质酶在农业、工业、食品、医药等领域展现出良好前景，具有重要的经济价值。但由于Bt 菌株几丁质酶产量普遍较低，制约了其在实际生产中的应用。因此，提高Bt 几丁质酶产量是几丁质酶开发应用的关键问题之一。

发明内容

本发明的目的是解决现有Bt 菌株几丁质酶产量普遍较低的问题，提供一种提高苏云芽孢杆菌产几丁质酶的培养基及培养方法。

为实现上述目的，本发明采用的技术方案是：一种提高苏云芽孢杆菌产几丁质酶的培养基，所述培养基原料配方为：17～25g/L葡萄糖或果糖，17～25g/L蛋白胨或酵母侵粉，4×10^-4mol/L Ba²⁺、Ca²⁺或K⁺，0.01w%Vc或V_B1，100ml/L胶体几丁质，KH₂PO₄0.6(g/L)，余量为水。

进一步的，所述培养基原料配方为：20g/L葡萄糖或果糖，17g/L蛋白胨或酵母侵粉，4×10^-4mol/L Ba²⁺、Ca²⁺或K⁺，0.01w%Vc 或V_B1，100ml/L胶体几丁质，KH₂PO₄0.6(g/L)，余量为水。

进一步的，所述培养基的pH值为5.5～7.0。

进一步的，所述培养基的pH值为6.5。

本发明的另一目的是提供一种提高苏云芽孢杆菌产几丁质酶培养方法，包括如下步骤：

步骤一、将苏云芽孢杆菌接种种子培养基，制得发酵种子液；

步骤二、将步骤一中制得的发酵种子液按接种于所述培养基，250mL的三角瓶装液量为50～100mL，接种量5～15mL，于26℃，转速160r/min 下培养。

进一步的，所述步骤一中的种子培养基的原料含有：150g/L 淀粉，葡萄糖20g/L。

本发明的有益技术效果是：本发明培养基条件温和，易于控制；提供的用于苏云芽孢杆菌发酵生产几丁质酶的培养基，具有几丁质酶产率高，几丁质酶活力高等优点。

具体实施方式

下面将结合本发明实施例，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。

实施例1

苏云芽孢杆菌产几丁质酶发酵方法

（1） 发酵种子的制备

（A）菌种和培养基

菌种：苏云芽孢杆菌；

斜面培养基：PDA培养基；

液体种子培养基：土豆150g，葡萄糖20g，蒸馏水定容至1000mL，自然pH，1.01MPa，灭菌20min。

（B）种子液制备

将斜面上的纯种苏云芽孢杆菌转接到多个250mL 三角瓶中，其中装有100mL 培养基，然后在27℃，在往复式震荡摇床转速160 r/min 下培养培养4d，带菌丝生长健壮，菌液呈粘稠状时，说明种子已经生长好了。

（2） 发酵培养

发酵培养基：按照培养基优化正交实验结果配制，即2g 葡萄糖，2g 蛋白胨，0.083g BaCl₂ (4×10-4mol/L Ba²⁺)，0.3g KH₂PO₄，0.01g Vc，蒸馏水定容至1000mL，pH 6.5，1.01MPa，灭菌20min。