[发明专利]基于微悬臂梁平台的蛋白质模式识别方法

权利要求书

1.一种基于微悬臂梁的蛋白质模式识别方法，其特征在于：

基于微悬臂梁技术，将含有不同化学基团的化合物修饰于悬臂梁表面作为传感阵列，待测蛋白与该阵列接触反应，不同蛋白与该传感阵列间的分子相互作用力不同，从而造成微悬臂梁偏移中心的距离不同，通过测量这种距离，获得一组指纹数据，可区分不同蛋白；还利用了线性判别分析法分析多组指纹数据，证明了该方法可区分不同的蛋白质，具体步骤如下：

（1）传感阵列的制备

选用单面镀金的微悬臂梁探针，利用金与巯基之间的化学键，将6种带有不同化学基团的巯基化合物固定于微悬臂梁探针的镀金表面；这6种物质分别为：（3-巯基丙基）三甲氧基硅烷，11-巯基-1-十一醇，苄硫醇，1-十二硫醇，11-巯基十一烷酸，2-二甲氨基乙硫醇盐酸盐；当然也可以采用更多带有其他基团的化合物；

先将微悬臂梁探针置于无水乙醇中3分钟，后用紫外线照射5分钟灭菌；将此探针固定于修饰样品台上，每个梁分别浸入毛细管的一端，毛细管的另一端浸入待修饰溶液，利用毛细管的虹吸效应，使得不同的悬臂梁修饰上不同的巯基化合物；巯基化合物溶解于乙醇溶液中，浓度为100nM，修饰在室温进行，时间为30分钟；

（2）蛋白检测

将修饰好的传感阵列，微悬臂梁探针，置于检测池中，控制检测温度为25℃；先向检测池中冲入TE缓冲溶液（Tris-HCl 10mM, EDTA 1mM, NaCl 1M, pH7.4），静待微悬臂梁信号平稳，即空白曲线平稳后，加入0.1mg/ml的待测蛋白溶液，溶剂同为TE缓冲液；这时，所有的微梁都会由于结合了蛋白而向上或向下弯曲，根据蛋白与传感阵列上修饰化合物之间结合力的不同，微梁最终会达到不同的平衡值；

我们分别检测了6种不同的蛋白，数均分子量从11.7KDa到340KDa，等电点从4.47-7.8；微梁在5分钟以内达到稳定信号值；

本发明所采用的蛋白分别为：白蛋白Mw=68KDa, pI=4.7-4.9，细胞色素CMw=38KDa, pI=4.47-4.57，纤维蛋白原Mw=340KDa, pI=4.8，免疫球蛋白 GMw=150KDa, pI=7.4，脂蛋白Mw=38KDa, pI=4.9，枯草杆菌蛋白酶 BMw=27.6KDa, pI=7.8。

2.根据权利要求1所述基于微悬臂梁技术的蛋白质模式识别方法，其特征在于，所述微悬臂梁的探针为镀金，或其他类型探针。

3.根据权利要求1所述基于微悬臂梁技术的蛋白质模式识别方法，其特征在于，所述修饰于微梁上的化合物还可为DNA，或无机分子，或有机分子；其用于固定不同化合物的方法还可为抗原抗体反应，或DNA配对。

4.根据权利要求1所述基于微悬臂梁技术的蛋白质模式识别方法，其特征在于，所述待测蛋白还可为蛋白质，或其他聚合物，或DNA，或生物大分子。