[发明专利]鱼翅食品中鲨鱼成分快速检测试剂盒及其检测方法

说明书

技术领域

本发明涉及生物检测方法，特别是涉及一种鱼翅食品中鲨鱼成分快速检测试剂盒及其检测方法。

背景技术

PCR是聚合酶链式反应的简称，是分子生物学中广泛运用的一种技术，主要原理是通过热循环，达到目的基因片段的大量扩增。目前这项技术越来越广泛地运用于产品检测之中。例如，运用PCR技术食品和饲料中的转基因、植物、芸豆、羊、鸡、鸭成分等，并制定成相关检测标准进行推广。

鲨鱼翅在民间通常以“鱼翅”简称。作为中国传统的名贵食品之一，实际是鲨鱼和某些鳐鱼鳍中的细丝状软骨，从鲨身体上割下的新鲜鱼鳍经去砂去骨干燥成片状后称为明翅，明翅煮后将细丝状软骨(翅筋)抽出，干燥成形后称为翅饼，翅筋的主要成分为胶原蛋白。在东亚各国，鱼翅为高档食品，消费量逐年提高。

但是据新闻报道饭店出售的鱼翅实际有相当一部分是假鱼翅，市场上大约四成是人造鱼翅，原料为淀粉，明胶、海藻酸钠等，成本不到10元，在饭店鱼翅动辄要到几百元甚至上千元一份，高利润使得造假鱼翅早已经形成了一条黑色的利益链，这些鱼翅从合成，到鱼翅精调制，到烧碱明胶双氧水泡制，含有大量损伤人肾脏消化系统和致癌的物质。

针对市场上鱼翅食品质量良莠不齐，掺假现象严重的现象，为了防止生产商和销售商生产、销售掺假、掺杂、伪造食品，保证食品质量，有必要寻找一种科学方法来检测鱼翅食品中的鲨鱼成分。

发明内容

基于此，有必要提供一种具有特异性强、灵敏度高、方法重现性好、检测快速简便的鱼翅食品中鲨鱼成分快速检测试剂盒及其检测方法。

一种鱼翅食品中鲨鱼成分PCR检测方法，包括以下步骤：

（1）提取待测样品的DNA为模板；

（2）以SEQIDNO:1和SEQIDNO:2为引物，进行PCR扩增；

（3）电泳鉴定。

在其中一个实施例中，DNA的提取包括：称取样品，粉碎，加入DNA提取缓冲液，将溶液在40～65℃下放置20～40min，加入体积比为25:24:1的苯酚:氯仿:异戊醇混合液进行提取；离心取上清，用体积比为24:1的氯仿:异戊醇混合液进行提取；离心取上清，加入等体积异丙醇，4～10℃放置0.5～2小时，高速离心，获得DNA沉淀，再用70%的乙醇溶液洗沉淀物，沉淀物加水溶解，即得样品DNA。

在其中一个实施例中，所述每克样品与DNA提取缓冲液体积的比例为1:4～8（g:mL）。

一种鱼翅食品中鲨鱼成分实时荧光PCR检测方法，包括以下步骤：

（1）提取待测样品的DNA为模板；

（2）以SEQIDNO:1和SEQIDNO:2为引物，SEQIDNO:3为探针，进行实时荧光PCR扩增。

在其中一个实施例中，DNA的提取包括：称取样品，粉碎，加入DNA提取缓冲液，将溶液在40～65℃下放置20～40min，加入体积比为25:24:1的苯酚:氯仿:异戊醇混合液进行提取；离心取上清，用体积比为24:1的氯仿:异戊醇混合液进行提取；离心取上清，加入等体积异丙醇，4～10℃放置0.5～2小时，高速离心，获得DNA沉淀，再用70%的乙醇溶液洗沉淀物，沉淀物加水溶解，即得样品DNA。

在其中一个实施例中，所述每克样品与DNA提取缓冲液体积的比例为1:4～8（g:mL）。

在其中一个实施例中，步骤（2）实时荧光PCR扩增结果为样品不含鲨鱼成分时，则以步骤（1）提取的DNA为模板，以SEQIDNO:1和SEQIDNO:2为引物，进行PCR扩增和电泳鉴定。

本发明的另一目的在于提供一种鱼翅食品中鲨鱼成分PCR检测试剂盒，包括SEQIDNO:1和SEQIDNO:2所示引物。

本发明的另一目的在于提供一种鱼翅食品中鲨鱼成分实时荧光PCR检测试剂盒，包括SEQIDNO:1和SEQIDNO:2所示引物，以及SEQIDNO:3所示探针。

本发明经过大量实验，先选取了能特异性检测出鲨鱼成分的目的基因片段（SEQIDNO:4229bp），再针对此目的基因，涉及了合适的引物，得到了检测试剂盒。本发明所述的鱼翅食品中鲨鱼成分实时荧光PCR检测试剂盒、鱼翅食品中鲨鱼成分PCR检测试剂盒和相应的检测方法具有特异性强、灵敏度高、方法重现性好、检测快速简便等优点；在普通PCR检测之前通过实时荧光PCR检测，可先将待测样品筛查一遍，筛查出的一部分样品后继续采用实时荧光PCR检测，减少后续普通PCR检测的工作量，可广泛应用于鱼翅类食品中鲨鱼基因的提取、成分鉴定等方面。

附图说明