[发明专利]直接发酵产妥布霉素工程菌及其构建和应用

权利要求书

1.直接发酵产妥布霉素工程菌，其特征是：该菌株安普霉素与氨甲酰妥布霉素的生物合成均被阻断，主要合成妥布霉素，该菌株被命名为Streptomyces tenebrarius 318 (△aprK+△tobZ)，其保藏编号为CGMCC 8285, 保藏单位：中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物菌种保藏中心，保藏地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3 号，保藏日期：2013 年9月25 日。

2.根据权利要求1所述的直接发酵产妥布霉素工程菌，其特征是：在野生型菌株中敲除安普霉素生物合成基因簇中的辛糖合成酶基因aprK。

3.根据权利要求1、2所述的直接发酵产妥布霉素工程菌，其特征是：在敲除aprK的基础上进一步敲除妥布霉素生物合成基因簇中的氨甲酰磷酸转移酶基因tobZ。

4.根据权利要求2所述的直接发酵产妥布霉素工程菌，其特征是：所述的野生型菌株为黑暗链霉菌，该菌株主要产生安普霉素，只有少量的氨甲酰妥布霉素和氨甲酰卡那霉素B。

5.根据权利要求2所述的直接发酵产妥布霉素工程菌，其特征是：敲除aprK基因的保守性序列。

6.根据权利要求3所述的直接发酵产妥布霉素工程菌，其特征是：敲除tobZ基因的保守性序列。

7.如权利要求1所述的直接发酵产妥布霉素工程菌的构建方法，其特征主要包括以下步骤：

（1）敲除aprK基因载体的构建；

（2）敲除aprK基因载体导入黑暗链霉菌；

（3）敲除aprK基因突变株的筛选与验证；

（4）敲除aprK基因工程菌发酵产物分析；

（5）敲除tobZ 基因载体的构建； 

（6）敲除tobZ 基因载体导入黑暗链霉菌；

（7）敲除tobZ 基因突变株的筛选与验证；

（8）敲除tobZ 基因工程菌发酵产物分析。

8.如权利要求1~7所述的直接发酵产妥布霉素工程菌在妥布霉素生产中的应用。