[发明专利]一种利用全细胞脂肪酸对沙门氏菌菌株的分类方法

说明书

技术领域

本发明属于生物工程技术领域，具体涉及一种利用全细胞脂肪酸对沙门氏菌菌株进行分类的方法。

背景技术

沙门氏菌是最常见的食源性致病菌，也是导致我国食源性疾病的主要病原体之一。据估计在中国将近22.2%的食源性细菌爆发是由沙门氏菌引起的。因此，对食物中毒主要病原菌沙门氏菌的分型,研究其相关性,以达到准确溯源,从而快速有效的控制由其引起的食物中毒。

目前，用来区分沙门氏菌的方法有许多种，主要包括抗生素敏感试验、噬菌体分型、血清型分类、多位点酶电泳(MLEE)、脉冲场凝胶电泳(PFGE)、扩增片段长度多态性(AFLP)和多位点序列分型(MLST)。除此之外，近年来，化学分类学特别是脂肪酸的化学分类学研究在细菌分类学方面也具有良好的分辨能力，以上方法均能够分型菌株，但其准确性、区分能力和再现性不同，将这些技术的特点相结合能够提高追踪流行病学研究的精确性。

但是，随着食源性致病菌的种类越来越复杂，病菌的成分越来越相似，在现有的分类方法时就病菌的分类显得不够精细、不够准确了。

发明内容

为了克服背景技术中的缺陷，本发明提出了一种分类更加精准、分类速度快、应用成本低的利用全细胞脂肪酸对沙门氏菌菌株的分类方法。

本发明的具体技术方案是：

一种利用全细胞脂肪酸对沙门氏菌菌株的分类方法，其特征在于，

包括以下步骤：

步骤1】选取多株沙门氏菌菌株，并获取多株沙门氏菌菌株的脂肪酸信息质谱，其具体是步骤是：

步骤1.1】将沙门氏菌菌株进行培养获得沙门氏菌菌株细胞；

步骤1.2】分别对沙门氏菌菌株细胞进行热裂解处理，形成气体产物；

步骤1.3】将气体产物注入气相色谱柱的系统进行处理，从而获得沙门氏菌菌株脂肪酸的信息质谱；

步骤2】对获得的每株沙门氏菌菌株脂肪酸的信息质谱进行谱库检索，确认每株沙门氏菌菌株脂肪酸种类和脂肪酸的含量；

步骤3】对上述步骤2】的结果采用最短距离法和欧氏距离法进行聚类分析,并绘制出沙门氏菌菌株的脂肪酸系统树状图谱；

步骤4】将待测试的沙门氏菌菌株，根据上述步骤1】和步骤2】获取菌株脂肪酸种类和脂肪酸的含量，将获得的结果和步骤3】中所获得的沙门氏菌菌株的脂肪酸系统树状图谱进行结合并绘制出新的沙门氏菌菌株的脂肪酸系统树状图谱，从而确定待测沙门氏菌菌株的类型。

上述步骤1.1】将沙门氏菌菌株进行培养获得沙门氏菌菌株细胞；其具体步骤是：

步骤1.1.1】沙门氏菌菌株预培养；

将沙门氏菌菌株接种于10mL的肉汤培养基中，保持温度在37℃，并在1580rpm转速的情况下震荡培养18-24h；

步骤1.1.2】沙门氏菌菌株进行二次培养；

提取上述步骤1.1.1】预培养菌液1mL并接种到100肉汤培养基中，在恒温摇床上，37℃恒温震荡培养18-24h。

步骤1.1.3】将0.5%的甲醛注入步骤1.1.2】的培养菌液中进行灭活处理；

步骤1.1.4】将灭活处理后的培养液在转速4000r/min的情况下离心处理2min，收集沙门氏菌菌株细胞；

步骤1.1.5】用灭菌蒸馏水对收集的沙门氏菌菌株细胞进行至少两次洗涤，然后使用无菌纯净水对收集的沙门氏菌菌株细胞进行预悬浮，最后将细胞移到容量瓶内冷冻干燥后保存。

上述步骤1.2】通过热裂解仪分别对沙门氏菌菌株细胞进行处理，从而形成气体产物；其具体是：使用热裂解仪在600℃的温度下进行裂解处理12s，喷射温度保持在280℃，从而形成气体产物。

上述步骤1.3】将气体产物注入气相色谱柱的系统进行处理，从而获得沙门氏菌菌株脂肪酸的信息质谱；其具体步骤是：

步骤1.3.1】设定气相色谱柱的系统内的初始温度为45℃，进样口温度为250℃，载气为氦气，流速36.5cm/s，分流比为30:1，离子源温度220℃，接口温度250℃，光谱扫描范围20–600U；

步骤1.3.2】将气体产物注入到设定气相色谱柱的系统内，按照逐渐升温的方式加热。

步骤1.3.3】对气体产物离子全扫描，获取气体产物中脂肪酸的信息质谱。

本发明的有益效果是：