[发明专利]一种利用全细胞脂肪酸对沙门氏菌菌株的分类方法

权利要求书

1.一种利用全细胞脂肪酸对沙门氏菌菌株的分类方法，其特征在于，包括以下步骤：

1】选取多株沙门氏菌菌株，并获取多株沙门氏菌菌株的脂肪酸信息质谱，其具体是步骤是：

1.1】将沙门氏菌菌株进行培养获得沙门氏菌菌株细胞；

1.2】分别对沙门氏菌菌株细胞进行热裂解处理，形成气体产物；

1.3】将气体产物注入气相色谱柱的系统进行处理，从而获得沙门氏菌菌株脂肪酸的信息质谱；

2】对获得的每株沙门氏菌菌株脂肪酸的信息质谱进行谱库检索，确认每株沙门氏菌菌株脂肪酸种类和脂肪酸的含量；

3】对上述步骤2】的结果采用最短距离法和欧氏距离法进行聚类分析,并绘制出沙门氏菌菌株的脂肪酸系统树状图谱；

4】将待测试的沙门氏菌菌株，根据上述步骤1】和步骤2】获取菌株脂肪酸种类和脂肪酸的含量，将获得的结果和步骤3】中所获得的沙门氏菌菌株的脂肪酸系统树状图谱进行结合并绘制出新的沙门氏菌菌株的脂肪酸系统树状图谱，从而确定待测沙门氏菌菌株的类型。

2.根据权利要求1所的利用全细胞脂肪酸对沙门氏菌菌株的分类方法，其特征在于：所述步骤1.1】将沙门氏菌菌株进行培养获得沙门氏菌菌株细胞；其具体步骤是：

1.1.1】沙门氏菌菌株预培养；

将沙门氏菌菌株接种于10mL的肉汤培养基中，保持温度在37℃，并在1580rpm转速的情况下震荡培养18-24h；

1.1.2】沙门氏菌菌株进行二次培养；

提取上述步骤1.1.1】预培养菌液1mL并接种到100肉汤培养基中，在恒温摇床上，37℃恒温震荡培养18-24h。

1.1.3】将0.5%的甲醛注入步骤1.1.2】的培养菌液中进行灭活处理；

1.1.4】将灭活处理后的培养液在转速4000r/min的情况下离心处理2min，收集沙门氏菌菌株细胞；

1.1.5】用灭菌蒸馏水对收集的沙门氏菌菌株细胞进行至少两次洗涤，然后使用无菌纯净水对收集的沙门氏菌菌株细胞进行预悬浮，最后将细胞移到容量瓶内冷冻干燥后保存。

3.根据权利要求1所的利用全细胞脂肪酸对沙门氏菌菌株的分类方法，其特征在于：所述步骤1.2】通过热裂解仪分别对沙门氏菌菌株细胞进行处理，从而形成气体产物；其具体是：使用热裂解仪在600℃的温度下进行裂解处理12s，喷射温度保持在280℃，从而形成气体产物。

4.根据权利要求1所的利用全细胞脂肪酸对沙门氏菌菌株的分类方法，其特征在于：所述步骤1.3】将气体产物注入气相色谱柱的系统进行处理，从而获得沙门氏菌菌株脂肪酸的信息质谱；其具体步骤是：

1.3.1】设定气相色谱柱的系统内的初始温度为45℃，进样口温度为250℃，载气为氦气，流速36.5cm/s，分流比为30:1，离子源温度220℃，接口温度250℃，光谱扫描范围20–600U；

1.3.2】将气体产物注入到设定气相色谱柱的系统内，按照逐渐升温的方式加热。

1.3.3】对气体产物离子全扫描，获取气体产物中脂肪酸的信息质谱。