[发明专利]一种促进马尾松组培继代芽生根方法

权利要求书

1.一种促进马尾松组培继代芽生根方法，其特征在于：包括丛芽诱导、丛芽伸长、继代培养、不定根诱导、不定根伸长、试管苗移栽的两步生根法，获得马尾松组培继代芽生根苗，其操作步骤如下：

（1）丛芽诱导：将马尾松种子消毒后，在无菌条件下进行种子萌发，然后截取带0.5 cm长下胚轴的无菌苗顶芽为外植体，在诱导培养基Ⅰ中进行丛芽诱导；

（2）丛芽伸长：将诱导出的丛生芽在伸长培养基Ⅱ中进行伸长培养；

（3）继代培养：将单个切下伸长芽的顶芽接种到继代增殖培养基Ⅲ中进行增殖，获得继代芽Ⅰ；将继代芽Ⅰ重复步骤（2）进行伸长，单个切下伸长的继代芽Ⅰ并分成顶芽和带侧芽芽段，然后在步骤（3）继代增殖培养基中继续增殖获得继代芽Ⅱ，将继代芽Ⅱ再重复步骤（2）和步骤（3），获得新的增殖继代芽；重复循环步骤（2）和（3），直至获得大量足够生根培养继代芽；

（4）不定根诱导：单个切下生长健壮、半木质化、高2-3 cm的继代芽，接种在含有萘乙酸（NAA）、吲哚丁酸（IBA）、蔗糖的1/2改良MS培养基Ⅳ中，诱导处理不定根原基21-28 d；

（5）不定根伸长：将具有肉眼可见不定根外植体转入含有活性炭（AC）或抗坏血酸（Vc）、蔗糖的1/2改良MS培养基Ⅴ中，促进不定根的表达与伸长；

（6）试管苗移栽：将已生根的再生植株移栽于泥炭土、蛭石和珍珠岩（1∶1∶1）混合基质中培育，喷水保湿。

2.根据权利要求1所述的一种促进马尾松组培继代芽生根方法，其特征在于：所述的培养基Ⅰ其原料含量为：6-BA 2.5-4.0 mg·L^-1、NAA 0.05-0.1 mg·L^-1、蔗糖30000 mg·L^-1、酸水解酪蛋白500 mg·L^-1和改良MS培养基。

3.根据权利要求1所述的一种促进马尾松组培继代芽生根方法，其特征在于：所述的培养基Ⅱ其原料含量为：NAA 0.25-0.4 mg·L^-1或活性炭3000-5000 mg·L^-1、蔗糖30000 mg·L^-1和改良MS培养基。

4.根据权利要求1所述的一种促进马尾松组培继代芽生根方法，其特征在于：所述的培养基Ⅲ其原料含量为：6-BA 1.0-3.0 mg·L^-1、KT 0-1.0 mg·L^-1、NAA 0-0.3 mg·L^-1、蔗糖30000 mg·L^-1和改良MS培养基。

5.根据权利要求1所述的一种促进马尾松组培继代芽生根方法，其特征在于：所述的培养基Ⅳ其原料含量为：NAA 0.05-0.1 mg·L^-1、IBA 1.0-2.5 mg·L^-1、蔗糖1.0-2.0%和1/2改良MS培养基。

6.根据权利要求1所述的一种促进马尾松组培继代芽生根方法，其特征在于：所述的培养基Ⅴ其原料含量为：AC 3000-5000 mg·L^-1或Vc 10-30 mg·L^-1、蔗糖2.0%和1/2改良MS培养基。