[发明专利]草莓斑驳病毒的快速检测试剂盒及方法

说明书

技术领域

本发明涉及草莓斑驳病毒的RT-LAMP检测引物组、检测试剂盒及方法。。

背景技术

草莓斑驳病毒（Strawberry mottle virus，SMoV）是温州蜜柑萎缩病毒属（Sadwavirus）病毒，目前在草莓栽培区广泛分布。为正义ssRNA病毒，RNA1长7036bp、RNA2长5619bp。病毒粒体等大，无包膜，粒体直径约37nm。侵染植株后会存在于叶片、表皮、韧皮部、细胞质中。该病毒主要通过蚜虫半持久性在草莓植株间传播。感染病毒的草莓植株主要症状为：叶脉透明、脉序混乱，叶片褪绿斑驳，植株矮化。症状在不同的季节而有所不同或隐症，但生长势衰弱，产量降低。该病毒存在广泛的株系分化现象，主要有草莓顶端串生株系（Strawberry crown prdiferation）、卷缩斑驳株系（Strawberry curly mottle virus）、轻型斑驳株系（Strawberry mild mottle virus）、重型斑驳株系（Strawberry severe mottle virus）、锈叶斑驳株系（Strawberry rusly leaf virus）及1号类型株系（Strawberry type1virus）。

由于草莓斑驳蚜虫传播等原因，病毒病害防治困难，因此，建立高效灵敏的检测技术，成为解决种苗检测、早期鉴定等问题的关键，为草莓栽培提供保障。草莓斑驳病毒的检测技术目前包括指示植物的小叶嫁接法、血清学方法和反转录-聚合酶链式反应（RT-PCR）等。小叶嫁接法、血清学方法周期长、灵敏度较低、较为费时费工，反转录-聚合酶链式反应（RT-PCR）检测病毒灵敏度高，但需要特殊的仪器和试剂，在农业生产单位和技术推广部门很难应用检测。

逆转录环介导等温扩增技术检测病毒操作简便，不需要特殊的仪器和试剂，操作简单，可以在恒温条件下快速检测，不需要长时间的温度循环，不需要昂贵的PCR仪，尤其是反转录和扩增反应都能在恒定温度下同时进行，大大的降低了检测时间，并且成本较低。反应完成后，通过荧光染色可以直接观察，也减少了时间，不需要电泳和紫外成像观察检测结果。逆转录环介导等温扩增技术与其他病毒检测方法相比，快速、简便、灵敏，目前尚未有将逆转录环介导等温扩增技术在草莓斑驳病毒检测上的应用。

发明内容

本发明的目的是提供检测草莓斑驳病毒（Strawberry mottle virus）的专用引物以及特异性强、灵敏度高、易于操作、结果可靠的草莓斑驳病毒（Strawberry mottle virus）的快速分子检测方法。

本发明所提供的检测草莓斑驳病毒（Strawberry mottle virus）的专用引物，由序列表的序列1所示DNA、序列表的序列2所示DNA、序列表的序列3所示DNA和序列表的序列4所示DNA组成。

本发明还提供一种检测草莓斑驳病毒（Strawberry mottle virus）的试剂盒，包括所述的专用引物。

本发明所述专用引物在制备检测草莓斑驳病毒（Strawberry mottle virus）的试剂盒中的应用也属于本发明的保护范围

上述专用引物或试剂盒在鉴定草莓斑驳病毒（Strawberry mottle virus）病毒病中的应用也是本发明的保护范围。

本发明还保护一种检测草莓斑驳病毒（Strawberry mottle virus）或检测草莓斑驳病毒（Strawberry mottle virus）病害发生危害的方法，包括如下步骤：

（1）提取待测生物样本的基因组RNA；

（2）以步骤（1）的基因组RNA为模板，用权利要求1所述的专用引物进行逆转录环介导恒温扩增；

（3）根据步骤（2）的扩增产物鉴定所述待测生物样本是否含有草莓斑驳病毒（Strawberry mottle virus）或者是否感染草莓斑驳病毒（Strawberry mottle virus）病害。

所述逆转录环介导恒温扩增的反应程序为：62℃45分钟，80℃10分钟。

所述逆转录环介导恒温扩增的反应体系中，序列表的序列1所示DNA和序列表的序列4所示DNA的浓度均为1.0μM，序列表的序列2所示DNA和序列表的序列3所示DNA的浓度均为0.1μM。