[发明专利]草莓斑驳病毒的快速检测试剂盒及方法

权利要求书

1.检测草莓斑驳病毒（Strawberry mottle virus）的专用引物，由序列表的序列1所示DNA、序列表的序列2所示DNA、序列表的序列3所示DNA和序列表的序列4所示DNA组成。

2.一种检测草莓斑驳病毒（Strawberry mottle virus）的试剂盒，包括权利要求1所述的专用引物。

3.权利要求1所述专用引物在制备检测草莓斑驳病毒（Strawberry mottle virus）的试剂盒中的应用。

4.权利要求1所述专用引物或权利要求2所述试剂盒在鉴定草莓斑驳病毒（Strawberry mottle virus）病毒病中的应用。

5.一种检测草莓斑驳病毒（Strawberry mottle virus）或检测草莓斑驳病毒（Strawberry mottle virus）病毒病感染的方法，包括如下步骤：

（1）提取待测生物样本的基因组RNA；

（2）以步骤（1）的基因组RNA为模板，用权利要求1所述的专用引物进行逆转录环介导恒温扩增；

（3）根据步骤（2）的扩增产物鉴定所述待测生物样本是否含有草莓斑驳病毒（Strawberry mottle virus）或者是否感染草莓斑驳病毒（Strawberry mottle virus）病害。

6.如权利要求5所述的方法，其特征在于：所述逆转录环介导恒温扩增的反应程序为：62℃45分钟，80℃10分钟。

7.如权利要求5或6所述的方法，其特征在于：所述逆转录环介导恒温扩增的反应体系中，序列表的序列1所示DNA和序列表的序列4所示DNA的浓度均为1.0μM，序列表的序列2所示DNA和序列表的序列3所示DNA的浓度均为0.1μM。

8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于：所述环介导恒温扩增的体系包括：1.0μM SMoV-FIP，1.0μM SMoV-BIP，0.1μM SMoV-F3，0.1μM SMoV-B3，10×Bst buffer，2mM MgSO₄，1.2mM dNTPs，1M Betaine，2mM DTT，5U AMV Reverse Transcriptase，25U RNase Inhibitor，8U Bst DNA polymerase，DEPC ddH₂O，扩增体系总体积为25μl。

9.根据权利要求8所述的方法，其特征在于：所述逆转录环介导恒温扩增产物的检测方法为下述1）或2）所述的方法：

1）扩增产物中加入0.1μl荧光染料SYBR green I，肉眼直接观察，染有草莓斑驳病毒的样本会有沉淀物形成并呈现黄绿色，无草莓斑驳病毒侵染的样本透明并呈橘红色；

2）常规电泳和紫外成像方法，感染有草莓斑驳病毒的样本能形成瀑布型条带。