[发明专利]花生青枯病菌环介导等温扩增检测引物及检测方法

权利要求书

1.一种花生青枯病菌的LAMP检测引物，其特征在于：根据花生青枯病菌的16S-23S rDNA ITS序列设计一种LAMP检测引物，包括一对外引物和一对内引物，外侧引物F3序列为SEQ ID NO:1；B3序列为SEQ ID NO:2；内侧引物FIP序列为SEQ ID NO:3；BIP序列为SEQ ID NO:4。

2.权利要求1所述的花生青枯病菌的LAMP检测引物的应用方法，其特征在于：利用所设计的LAMP检测引物进行扩增，LAMP反应体系为25 μl，包括5μM外侧引物F3和B3各0.25μl，40μM内侧引物FIP和BIP各0.25μl，反应混合液18.0μl，8UBst DNA 聚合酶1μl，DNA模板25ng，用灭菌超纯水补足至25 μl；LAMP反应条件为65℃温育60 min，82℃保温10min；

所述的反应混合液中各组分的浓度为40mM Tris-HCl，20mM (NH₄)₂SO₄，20mM KCl，16 mM MgSO₄，0.2% Triton X-100，1.6M Betaine，2.8 mM dNTPs。

3.根据权利要求2所述的花生青枯病菌的LAMP检测引物的应用方法，其特征在于：在LAMP反应的扩增产物中加入显色剂SYBR green Ⅰ 1μl，显色结果观察到绿色荧光判断为阳性，橙色判断为阴性；或取2μl扩增产物用2%琼脂糖凝胶电泳检测，如出现梯形条带判断为阳性，没有出现则判断为阴性。