[发明专利]一种提高体外受精胚胎发育率的方法

权利要求书

1.一种提高体外受精胚胎发育率的方法，其特征在于，步骤如下：

1)在猪卵母细胞体外成熟液中培养具有完整的三层以上卵丘细胞的卵母细胞；

2)通过检测猪卵母细胞体外成熟过程中极体排放比例，确定猪卵母细胞成熟培养时间为33-42h；

3)通过检测猪成熟卵母细胞中谷胱甘肽含量，将猪卵母细胞体外成熟培养至33-39h进行体外受精；

4)成熟卵母细胞体外受精前的准备

将体外成熟培养卵母细胞移入预先平衡的受精液中洗涤，然后移入预平衡的受精液微滴中,置入二氧化碳培养箱中等待体外受精，每个受精滴放入成熟卵母细胞；

5)精子的准备

采取新鲜精液，用精液稀释粉进行稀释，取出精液于烘箱孵育，离心弃上清，用含BSA的DPBS悬浮，重复离心，悬浮，然后利用细胞计数板进行计数，并利用受精液调整精子浓度；

6)体外受精

取精子悬液加入到受精滴中，将成熟卵母细胞与精子在二氧化碳培养箱中共孵育；

7)体外受精胚胎体外培养及检测

将成熟的卵母细胞与精子共培养后从受精滴中挑出，然后用欲平衡的胚胎培养液将受精卵洗涤，转到预平衡的胚胎培养液滴中，移入受精卵，置于二氧化碳培养箱中培养。

2.根据权利要求1所述方法，其特征在于，步骤如下：

1)在猪卵母细胞体外成熟液中培养具有完整的三层以上卵丘细胞的卵母细胞；

2)通过检测猪卵母细胞体外成熟过程中极体排放比例，确定猪卵母细胞成熟培养时间为33-42h；

3)通过检测猪成熟卵母细胞中谷胱甘肽含量，将猪卵母细胞体外成熟培养至33-36h进行体外受精。

3.根据权利要求1所述方法，其特征在于，步骤如下：

1)在猪卵母细胞体外成熟液中培养具有完整的三层以上卵丘细胞的卵母细胞；

2)通过检测猪卵母细胞体外成熟过程中极体排放比例，确定猪卵母细胞成熟培养时间为33-42h；

3)通过检测猪成熟卵母细胞中谷胱甘肽含量，将猪卵母细胞体外成熟培养至33h进行体外受精。

4.根据权利要求1所述方法，其特征在于，所述猪卵母细胞体外成熟培养步骤为：收集卵巢，抽取直径为3-5mm的有腔卵泡，在洗卵液中洗涤，实体显微镜下挑选具有完整的三层以上卵丘细胞的卵母细胞，然后在成熟液中洗涤，将洗净的卵母细胞移入卵母细胞体外成熟培养滴中，每滴放入40-50枚卵细胞，最后置入饱和湿度的二氧化碳培养箱中进行培养。

5.根据权利要求1所述方法，其特征在于，所述猪卵母细胞体外成熟培养步骤为：收集卵巢并在37℃的生理盐水中，抽取直径为3-5mm的有腔卵泡，在洗卵液中洗涤3次，实体显微镜下挑选具有完整的三层以上卵丘细胞的卵母细胞，然后在成熟液中洗涤3次，将洗净的卵母细胞移入500μL卵母细胞体外成熟培养滴中，每滴放入40-50枚卵细胞，最后置入培养的条件为38.5℃，5％CO₂，饱和湿度的二氧化碳培养箱中进行培养。