[发明专利]AFP和IL-2双基因共表达重组载体及其制备方法和应用

说明书

技术领域

本发明涉及一种重组载体及其制备方法和应用，特别是涉及一种双基因共表达重组载体及其制备方法和应用。

背景技术

原发性肝细胞癌（Hepatocellular Carcinoma，HCC）是最常见的恶性肿瘤之一，我国是肝癌的高发区，每年发生的肝癌占全世界的50％以上，肝癌死亡率己占全国肿瘤死亡率的第二位，是一种严重威胁人们生命健康的疾病。手术切除是目前疗效最好的肝癌治疗手段，目前肝移植技术亦相当成熟，但由于费用高、供体来源困难，术后使用抗排斥药物会因免疫抑制而使残癌生长更快和出现转移等问题，对中晚期肝癌的疗效欠佳。

近年来，随着分子生物学和肿瘤免疫学等学科的飞速发展，肿瘤免疫治疗已成为肿瘤治疗研究的热点，多种免疫治疗方法已用于肝癌的临床研究，比如细胞因子治疗，自体完整的肿瘤细胞疫苗，效应细胞回输治疗，以树突状细胞为基础的肝癌疫苗等。目前，多种不同的免疫治疗策略已经显示了抗肝癌的生物免疫活性和初步的临床效力，能够影响肝癌复发和治疗后生存期。其中，细胞因子基因免疫治疗是肿瘤免疫治疗与基因治疗的结合，其通过将具有抗肿瘤作用的细胞因子基因导入宿主体内，并使之稳定有效地表达，使体内持续存在一定水平的内源性细胞因子，以发挥抗肿瘤的作用。然而，目前的细胞因子基因免疫治疗方法缺乏肿瘤靶向性，其抗肿瘤效果有待提高。

白细胞介素-2（interleukin-2，IL-2），又名T细胞生长因子(T cell growth factor，TCRF)，是主要由活化的CD4+T细胞和CD8+T细胞产生的具有广泛生物活性的细胞因子。IL-2是所有T细胞亚群的生长因子，并可促进活化B细胞增殖，故为调控免疫应答的重要因子，其亦参与抗体反应、造血和肿瘤监视。IL-2抗肿瘤作用的机制主要通过刺激机体的固有免疫系统和获得性免疫系统来对肿瘤细胞进行杀伤作用。IL-2可以促进某一特定T细胞群的克隆性扩增，其可通过提高NK细胞与淋巴激活杀伤细胞（LAK）的细胞数量和活性，并激活TIL细胞，从而诱导机体抗肿瘤免疫反应，使肿瘤生长停止或瘤体消退。此外，IL-2也在调节T细胞成熟过程中起重要作用，同时也能协同刺激B细胞增殖与分泌、增强活化的T细胞产生干扰素。

近年来，IL-2因其能够激活抗肿瘤免疫作用，被认为是治疗消化系统实质性肿瘤的有效选择。联合使用吉西他滨和IL-2对于胰腺癌肝转移的治疗或是胰腺癌术后预防肝转移都有较好的效果。研究发现，IL-2是肝癌病人的一个重要的预后影响因子，甚至对于一些早期的病人来说也是如此；经门静脉直接注射IL-2能够更好地刺激肝脏自然杀伤细胞（Nature Killer Cell，NK细胞），对肝脏肿瘤起杀伤作用；而联合使用IL-2和IL-12被报道能够提高肝癌术后患者机体免疫能力并延长生存率。然而，目前的IL-2基因免疫治疗方法只是局部地提高机体的IL-2蛋白表达水平，其免疫调节作用、抗肿瘤能力较小，且缺乏免疫治疗的靶向性。

甲胎蛋白（Alpha Fetoprotein，AFP）是一个胚胎特异性的α-球蛋白，是哺乳动物早期胚胎血清中的一个重要的组份。正常情况下，AFP是由胎儿的肝脏和卵黄囊产生的，胎儿出生后，血清中的AFP含量迅速下降，在正常的成人体内是检测不到或仅有极其微量的AFP。AFP是人类发现的第一个具有临床应用价值的肿瘤标志物，一直以来被认为是诊断原发性肝细胞癌的重要标志物。在成人中，约有80%的原发性肝细胞癌患者的血清中，都可以检测到AFP的表达，显示AFP筛查是发现早期肝癌的一种高效的手段。AFP可以作为肿瘤标志物，作为肿瘤免疫治疗的靶位，刺激机体产生体液免疫和细胞免疫，肿瘤细胞可以在其表面表达并递呈AFP多肽与MHC复合物，进而刺激机体免疫系统，产生特异性杀伤性T细胞，杀伤肿瘤细胞。研究表明，AFP可以和多种抗癌药物结合，并通过受体介导的胞吞作用选择性地进入肿瘤细胞，从而靶向、高效地杀死肿瘤细胞。

发明内容

基于此，有必要针对现有技术存在的缺陷，提供一种AFP和IL-2双基因共表达重组载体，该重组载体可用于肝癌的基因免疫治疗，既能发挥细胞因子的的免疫调节作用，又能靶向性地针对肝癌产生特异性抗肿瘤效应。

本发明的另一个目的是，提供所述AFP和IL-2双基因共表达重组载体的制备方法。

本发明的再一个目的是，提供所述AFP和IL-2双基因共表达重组载体在肝癌的基因免疫治疗中的应用。