[发明专利]一种玉米赤酶烯酮化学发光检测试剂盒

说明书

技术领域

本发明属于免疫学检测领域，具体涉及一种玉米赤霉烯酮化学发光检测试剂盒。

背景技术

目前检测谷物中真菌毒素残留的技术主要有以下几种方法：

（1）理化检测法：20世纪90年代以后，绝大多数测定谷物中真菌毒素残留的理化检测法主要依靠液相色谱技术进行分离，其次是色／质谱联用技术，气相色谱法、高效薄层色谱法等检测法，因其各自特有的性能，在真菌毒素检测方面稍有应用。色谱法检测谷物中真菌毒素残留要经过样品处理(包括样品的提取、脱蛋白、离心、层析柱净化、衍生化等步骤)、残留药物的分离和残留药物的检测。理化检测法利用毒素分子中的基团所具有的特殊反应或性质来测定其含量，能进行定性、定量分析和药物鉴定，可作为谷物中真菌毒素残留检测的确证方法。该法检测敏感性较高，但仪器及检测费用高、检测程序复杂、较耗时间等。

（2）免疫学分析法：免疫学分析法是以抗原与抗体的特异性、可逆性结合反应为基础的分析方法，目前真菌毒素残留免疫分析技术主要分三大类：相对独立的分析方法、免疫分析技术与常规理化分析技术联用的方法、免疫受体法。1973年荷兰van weeman、schurrs及瑞典Engvall、Perlmann分别提出酶联免疫吸附法，30多年来国内外学者对免疫学方法检测谷物中真菌毒素残留进行了大量研究。但由于毒素是半抗原，抗原构建技术难度大、免疫特异性强、检测成本高，目前IDEXX实验室公司等在免疫分析法方面的研究较为成熟，国内该技术仍处于研究发展中。但是酶联免疫吸附法与发光法相比，酶联免疫吸附法灵敏度较低，检测结果不精确，影响进一步研究。

发明内容

本发明的目的是提供一种玉米赤酶烯酮化学发光检测试剂盒，不仅灵敏度高、检测范围宽、操作简便快速、无毒无污染，而且所用器材、价格低廉，易于普及使用。

本发明所采用的技术方案是，一种玉米赤酶烯酮化学发光检测试剂盒，由发光板、试剂和盒体构成，试剂放置在盒体中，所述试剂由辣根过氧化酶标记的玉米赤酶烯酮多克隆抗体、玉米赤酶烯酮标准溶液、浓缩磷酸盐缓冲液、浓缩洗涤液、化学发光底物液和包被抗原组成，所述辣根过氧化酶标记的玉米赤酶烯酮多克隆抗体为以玉米赤酶烯酮与卵清蛋白偶联作为免疫原的大白兔抗体；

所述玉米赤酶烯酮与卵清蛋白偶联的免疫原制备方法，包括以下步骤：

 (1)称取10mg的对氨基苯甲酸加入到体积为1.1mL 的氯化铵溶液中，制得对氨基苯甲酸溶液；之后称取6mg的NaNO₂加入到体积为0.35mL的蒸馏水中，在温度为0-4℃的条件下搅拌均匀，制得NaNO₂溶液；将NaNO₂溶液逐滴加入到对氨基苯甲酸溶液中，避光反应1小时，得溶液A；

 (2)量取2.4μL玉米赤酶烯酮溶液加入到体积为10mL的硼砂缓冲液中，并在温度为0-4℃下搅拌均匀，之后向该溶液中逐滴加入0.9mL 的溶液A，避光反应2小时，得到桔黄色溶液B；所述硼砂缓冲液的浓度为0.05mol/L，pH值为8.5，硼砂缓冲液中含有浓度为0.15mol/L的NaCl；

(3)向溶液B中加入H₃BO₃晶体直至溶液B的pH值为7.4，之后向调过pH值的溶液B中加入94mgBSA，80mgEDC，24mgNHS，在室温条件下搅拌2小时，得桔黄色溶液C； 

(4)将溶液C转移到透析袋中，之后用PBS缓冲液在温度为0-4℃的条件下透析五天，每12小时更换一次PBS缓冲液，将透析后的溶液冻干，得到淡黄色固体粉末即为免疫原，将免疫原放置在温度为-20℃的条件下保存，备用；所述PBS缓冲液的pH值为7.4，浓度为0.01mol/L； 

所述包被抗原的制备方法，包括以下步骤：

(1)称取9mg的NaNO₂加入到体积为3mL的蒸馏水中，制得NaNO2溶液，然后称取10mg的玉米赤酶烯酮加入到体积为1.6mL、浓度为0.2mol/L的盐酸溶液中，在温度为0-4℃的条件下搅拌均匀，制得赤酶烯酮溶液，将NaNO₂溶液逐滴加入赤酶烯酮溶液中，避光反应0.5小时，之后向该溶液中加入25mg硫酸铵直至无氮气放出，制得溶液D；