[发明专利]一种玉米赤酶烯酮化学发光检测试剂盒

权利要求书

1.一种玉米赤酶烯酮化学发光检测试剂盒，由发光板、试剂和盒体构成，试剂放置在盒体中，其特征在于：所述试剂由辣根过氧化酶标记的玉米赤酶烯酮多克隆抗体、玉米赤酶烯酮标准溶液、浓缩磷酸盐缓冲液、浓缩洗涤液、化学发光底物液和包被抗原组成，所述辣根过氧化酶标记的玉米赤酶烯酮多克隆抗体为以玉米赤酶烯酮与卵清蛋白偶联作为免疫原的大白兔抗体；

所述玉米赤酶烯酮与卵清蛋白偶联的免疫原制备方法，包括以下步骤：

 (1)称取10mg的对氨基苯甲酸加入到体积为1.1mL 的氯化铵溶液中，制得对氨基苯甲酸溶液；之后称取6mg的NaNO₂加入到体积为0.35mL的蒸馏水中，在温度为0-4℃的条件下搅拌均匀，制得NaNO₂溶液；将NaNO₂溶液逐滴加入到对氨基苯甲酸溶液中，避光反应1小时，得溶液A；

 (2)量取2.4μL玉米赤酶烯酮溶液加入到体积为10mL的硼砂缓冲液中，并在温度为0-4℃下搅拌均匀，之后向该溶液中逐滴加入0.9mL 的溶液A，避光反应2小时，得到桔黄色溶液B；所述硼砂缓冲液的浓度为0.05mol/L，pH值为8.5，硼砂缓冲液中含有浓度为0.15mol/L的NaCl；

(3)向溶液B中加入H₃BO₃晶体直至溶液B的pH值为7.4，之后向调过pH值的溶液B中加入94mgBSA，80mgEDC，24mgNHS，在室温条件下搅拌2小时，得桔黄色溶液C； 

(4)将溶液C转移到透析袋中，之后用PBS缓冲液在温度为0-4℃的条件下透析五天，每12小时更换一次PBS缓冲液，将透析后的溶液冻干，得到淡黄色固体粉末即为免疫原，将免疫原放置在温度为-20℃的条件下保存，备用；所述PBS缓冲液的pH值为7.4，浓度为0.01mol/L； 

所述包被抗原的制备方法，包括以下步骤：

(1)称取9mg的NaNO₂加入到体积为3mL的蒸馏水中，制得NaNO2溶液，然后称取10mg的玉米赤酶烯酮加入到体积为1.6mL、浓度为0.2mol/L的盐酸溶液中，在温度为0-4℃的条件下搅拌均匀，制得赤酶烯酮溶液，将NaNO₂溶液逐滴加入赤酶烯酮溶液中，避光反应0.5小时，之后向该溶液中加入25mg硫酸铵直至无氮气放出，制得溶液D；

(2)称取70mg卵清蛋白加入到4mL的PBS缓冲溶液中，所述PBS缓冲溶液的浓度为0.1mol/L，pH值为7.5，然后将溶液D逐滴加入到该溶液中，制得混合液,然后用浓度为1mol/L的氢氧化钠溶液将混合液的pH值调至7.5，并在温度为0-4℃的条件下避光反应18小时，制得溶液E； 

(3)将溶液E转移到透析袋中，并在温度为0-4℃的条件下，用浓度为0.01mol/L，pH值为7.4的PBS缓冲液透析五天，每12小时更换一次PBS缓冲液，之后将透析液置于转速为3000r/min的离心机中离心15分钟，提取上清液并冻干，得到淡黄色固体粉末即为包被抗原，之后将包被抗原置于温度为-20℃的条件下保存，备用。

2.根据权利要求1所述的一种玉米赤酶烯酮化学发光检测试剂盒，其特征在于：所述化学发光底物液，包括A液和B液，所述A液的制备方法是：将浓度为0.01mol/L的鲁米诺溶解到浓度为0.01M、pH为8.8的Tris缓冲液中制得；所述B液的制备方法是：先将浓度为0.001mol/L的对碘苯酚溶解到浓度为0.01mol/L、pH为8.8的Tris缓冲液中，之后再向缓冲液中加入双氧水与水比例为3:10000的无菌水。

3.根据权利要求1所述的一种玉米赤酶烯酮化学发光检测试剂盒，其特征在于：所述玉米赤酶烯酮标准液的浓度分别为30ng/ml、60ng/ml、200ng/ml、500ng/ml。

4.根据权利要求1所述的一种玉米赤酶烯酮化学发光检测试剂盒，其特征在于：所述的浓缩洗涤液由NaCl 80g、KH₂P0₄ 2.0g、Na₂HP0₄·12H₂O 229.0g、KC1 2.0g和吐温-20溶于1000mL蒸馏水中搅拌均匀后制得，制得的浓缩洗涤液中吐温-20质量百分比浓度为0.5%。