[发明专利]一种热稳定性及比酶活提高的角蛋白酶及其制备方法和应用

权利要求书

1.一种热稳定性及比酶活提高的角蛋白酶，其特征在于对现有的角蛋白酶前导肽切割位点进行突变及N端改造。

2.如权利要求1所述的角蛋白酶，其氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。

3.获得权利要求2所述角蛋白酶的方法，其特征在于以GenBank登录号为JX504681公布的基因序列基础上，对前导肽切割位点区域进行分子改造，具体为前导肽的C端（-1）位点Leu替换为Ala，成熟酶N端氨基酸AQTVP替换为YTPNDPYFSSRQ。

4.产权利要求1或2所述产角蛋白酶的基因工程菌或转基因细胞系。

5.一种构建产权利要求2所述角蛋白酶的基因工程菌的方法，其特征在于包括如下步骤：

1）采用化学全合成或PCR方法克隆编码权利要求2所述角蛋白酶的基因；

2）将步骤1）获得的角蛋白酶基因连接到枯草杆菌表达载体，得到重组表达载体；

3）将步骤2）获得的重组表达载体转化Bacillus subtilis WB600得到基因工程菌。

6.权利要求5所述的方法，其特征在于所述表达载体为pMA5。

7.一种发酵生产角蛋白酶的方法，其特征在于以权利要求5获得的产角蛋白酶基因工程菌为生产菌株，斜面活化制备种子后，以3%的接种量转入已优化的基本发酵培养基，于37℃、200rpm条件下培养24h。

8.权利要求7所述的方法，其特征在于基本发酵培养基组成为胰蛋白胨10g/L，酵母抽提物5g/L，NaCl10g/L，葡萄糖10g/L，0.1g/L MgSO₄。