[发明专利]抗日本血吸虫Sjp40鸡卵黄抗体及其制备方法与应用

说明书

技术领域

本发明涉及生物技术领域，尤其是抗日本血吸虫Sjp40鸡卵黄抗体及其制备方法与应用。

背景技术

血吸虫病是一种热带寄生虫引起的疾病，它是一种重要的人畜共患病，目前全球8亿人受威胁，2亿人感染，每年约有280万人死于该病。我国为日本血吸虫病流行区，是全球血吸虫病危害最严重的国家之一。血吸虫病的主要危害在于虫卵所分泌的可溶性虫卵抗原（soluble egg antigen,SEA）导致的肉芽肿病变。若能实现早期诊断，可及时及早地诊治病人与家畜，对阻断严重病变的发生和发展具有重要意义。

研究表明P38蛋白（Sjp40）是SEA中分子量约为38kD，是一种新型的优势抗原分子。以感染前和感染后2周、4周、6周兔混合血清以及急性、慢性日本血吸虫病人和正常人血清，对日本血吸虫虫卵可溶性抗原(soluble egg antigen,SEA)进行了全面的分析与筛选。结果38kDa能被IgG、IgM、IgA三种抗体所识别，它是SjSEA中具有潜力的早期诊断靶抗原。

抗体由于针对抗原具有高特异性、高敏感性的特点，使之在感染疾病的诊断方法具有广阔的临床应用前景。目前已有应用单克隆抗体反向间接红细胞凝集试验（McAb-RIHA）检测日本血吸虫循环抗原，有较好的敏感性和特异性，但对不同寄生虫病人及感染动物存在不同情况的交叉反应。

鸡卵黄免疫球蛋白（egg yolk immunoglobulin，IgY）是鸡血液中的IgG被选择性转移到卵黄中形成的多克隆抗体。IgY以其独特的结构和免疫特性成为近年来的研究热点，IgY分子量约为180KDa，由65-70KDa的重链和22-30KDa的轻链组成。IgY与哺乳动物免疫球蛋白相比，IgY用于免疫检测诊断有许多优点：它从鸡蛋中获得，避免动物出血，不与类风湿因子发生非特异性反应，不会激活补体系统，具有显著的耐酸碱性、温度和胃蛋白酶。

医学工作者对检测日本血吸虫病进行大量的研究，已取得了一定的进展，但以IgY用作日本血吸虫Sjp40抗原的研究方面尚未有报道。

发明内容

本发明所要解决的技术问题在于提供抗日本血吸虫Sjp40鸡卵黄抗体。

本发明所要解决的另一技术问题在于提供所述抗日本血吸虫Sjp40鸡卵黄抗体的制备方法。

本发明所要解决的另一技术问题在于提供所述抗日本血吸虫Sjp40鸡卵黄抗体的应用。

为解决上述技术问题，本发明的技术方案是：

抗日本血吸虫Sjp40鸡卵黄抗体，可与Sjp40特异性结合，其抗原特异性结合活性检测中可识别Sjp40，且OD值随着抗体稀释度降低而减小,具有抗原浓度依赖性，所述抗体是由下述方法得到的：

（1）收集用纯化的SjP40抗原初次免疫的健康SPF级产蛋鸡的鸡蛋，采用水稀释硫酸铵沉淀法从鸡蛋中初步提取IgY；

（2）再依次经透析袋、DEAE-FF阴离子交换柱进一步纯化IgY；

（3）用聚丙烯酰胺凝胶电泳、Western blotting及ELISA对IgY进行分析鉴定。

上述抗日本血吸虫Sjp40鸡卵黄抗体的制备方法，具体步骤为：

（1）收集用纯化的SjP40抗原初次免疫的健康SPF级产蛋鸡的鸡蛋，采用水稀释硫酸铵沉淀法从鸡蛋中初步提取IgY；

（2）再依次经透析袋、DEAE-FF阴离子交换柱进一步纯化IgY；

（3）用聚丙烯酰胺凝胶电泳、Western blotting及ELISA对IgY进行分析鉴定。

优选的,上述抗日本血吸虫Sjp40鸡卵黄抗体的制备方法，具体步骤为：

（1）收集用纯化的SjP40抗原初次免疫10天后的健康SPF级产蛋鸡的鸡蛋，取卵黄与蒸馏水按1:8稀释，盐酸调PH至4.2-4.4，搅匀4℃静置过夜后，4℃，12000r/min离心30min收集上清得水溶性组分。向WSF中滴加等体积40%硫酸铵盐析，再同上法4℃静置过夜并离心；