[发明专利]一种油脂中游离型及结合型3-氯-1,2-丙二醇检测中的样品预处理方法

说明书

技术领域

本发明涉及油脂样品的预处理方法，尤其涉及用于油脂中游离型及结合型3-氯-1，2-丙二醇（3-MCPD）检测中的样品预处理方法。

背景技术

3-氯-1,2-丙二醇酯（3-MCPDE）是油脂及含油脂食品在热加工过程中形成的副产物，以结合3-MCPD的形式存在于油脂中。由于3-氯-1,2-丙醇酯在特定的条件下可水解形成游离的3-MCPD从而表现其毒性，因此研究学者认为其是一种潜在的食品安全危害因子。油脂中3-MCPDE形成机理及影响因素是目前国内外的研究热点，为了探明这些问题，需要有方便可行的样品预处理方法做支持。

文献报道的检测油脂中游离及结合3-MCPD的方法中，根据所针对的目标化合物的种类，可以大体分为两类：间接法和直接法。间接法是通过将结合3-MCPD通过碱催化、酶催化或酸催化的方法进行醇解后生成游离3-MCPD，再对游离3-MCPD进行衍生化反应后通过GC-MS检测；直接法是将结合3-MCPD通过LC-MS进行分析，而不需进行醇解操作。由于油脂组成中脂肪酸的种类较多，按照植物油中主要的7种脂肪酸来计算，3-MCPDE在甘油骨架sn-1、sn-2位的排列组合的种类就有63种之多，若将其余种类的脂肪酸也统计进来，3-MCPDE的种类将更加繁多。直接测定方法的主要缺陷就在于可商品化供应的3-氯丙醇酯及相应的氘代3-氯丙醇酯的种类有限，无法从市场上购买到不同碳数脂肪酸组成的3-氯丙醇酯及相应的氘代3-氯丙醇酯化合物标准品，要想对油脂样品中的3-氯丙醇酯用3-氯丙醇酯及相应的氘代3-氯丙醇酯化合物标准品进行一一的对应非常困难。因此，目前研究学者多数采用间接法对游离及结合3-MCPD进行检测。

众所周知，油脂是一种混合物，主要成分为甘油三酯，此外还含有游离脂肪酸、磷脂、色素、VE、甘油一酯、甘油二酯等组分，为了准确测定油脂中游离及结合3-MCPD的含量，需要采取相应的措施去除这些组分对测定的干扰。目前文献报道的用于检测油脂中游离及结合3-MCPD的样品预处理方法主要采用硅胶柱层析和固相萃取柱萃取两类。

Zelinková采用硅胶柱层析的方法对乳脂样品进行前处理（Haines,T.D.,et al.,Direct Determination of MCPD Fatty Acid Esters and Glycidyl Fatty Acid Esters in Vegetable Oils by LC-TOFMS.Journal of the American Oil Chemists Society,2011.88(1):1-14.），具体步骤为：在200mg乳脂中加入7.26μg氘代3-氯丙醇二棕榈酸酯（3-MCPD-d5-1，2-dipalmitate）内标物，用1mL正己烷溶解后上样到330×20mm硅胶柱（silica gel60,70-230mesh;Merck,Darmstadt,Germany），用石油醚（沸点45～65℃）:乙醚=95:5（v/v）混合溶剂500mL以4mL/min的速率洗脱，收集含有3-氯丙醇酯的组分，旋蒸后，用200μL四氢呋喃溶解，准备进行GC-MS分析。Moravcova也采用了硅胶柱层析的方法从油脂样品中分离3-氯丙醇二酯（Moravcova,E.,et al.,Novel approaches to analysis of3-chloropropane-1,2-diol esters in vegetable oils.Anal Bianal Chem,2012.402(9):2871-83.），操作步骤为：称量8±0.1mg油样于2mL小瓶中，用30μL氘代内标溶液（3-MCPD-d5-1，2-dipalmitate的乙酸乙酯溶液，浓度300ng/mL）溶解，然后上样到装填了1.8g硅胶（用正己烷:乙醚=96:4，v/v混合溶剂溶胀）的180×4mm玻璃柱，用30mL正己烷:乙醚=96:4，v/v混合溶剂洗脱，流速0.8mL/min，收集5～25mL的部分（含有3-氯丙醇二酯），旋转蒸发溶剂，用200μL甲醇重新溶解准备进行U-HPLC-MS和DART-MS分析。硅胶柱层析方法的不足之处是整个预处理的周期较长，耗用溶剂量较大（有的甚至大于500mL），且柱子的装填效果直接影响样品预处理的效果，样品预处理结果的再现性受到很大影响。