[发明专利]重编程培养基、其制备方法及重编程细胞的培养方法

权利要求书

1.一种重编程培养基，其特征在于，包括基础培养基，重编程添加剂1及重编程添加剂2；

其中，所述基础培养基为DMEM/F12培养基；

所述重编程添加剂1包括碳酸氢钠400～600ug/ml、硒酸钠8～20ng/ml、重组人胰岛素15～30ug/ml、重组人碱性成纤维细胞生长因子80～120ng/ml、重组人转铁蛋白7～13ug/ml、抗坏血酸50～70ug/ml以及氢化可的松0.5～2uM；

所述重编程添加剂2包括碳酸氢钠400～600ug/ml，硒酸钠8～20ng/ml，重组人胰岛素15～30ug/ml，重组人碱性成纤维细胞生长因子80～120ng/ml，重组人转铁蛋白7～13ug/ml，抗坏血酸50～70ug/ml，丙戊酸0.5～2mM以及丁酸钠80～200uM。

2.根据权利要求1所述的重编程培养基，其特征在于，

所述重编程添加剂1包括碳酸氢钠520～580ug/ml、硒酸钠12～16ng/ml、重组人胰岛素18～22ug/ml、重组人碱性成纤维细胞生长因子90～110ng/ml、重组人转铁蛋白10～12ug/ml、抗坏血酸63～66ug/ml以及氢化可的松0.9～1.1uM；

所述重编程添加剂2包括碳酸氢钠520～580ug/ml、硒酸钠12～16ng/ml、重组人胰岛素18～22ug/ml、重组人碱性成纤维细胞生长因子90～110ng/ml、重组人转铁蛋白10～12ug/ml、抗坏血酸63～66ug/ml以及丙戊酸0.9～1.2mM以及丁酸钠140～160uM。

3.根据权利要求2所述的重编程培养基，其特征在于，

所述重编程添加剂1包括碳酸氢钠543ug/ml、硒酸钠14ng/ml、重组人胰岛素20ug/ml、重组人碱性成纤维细胞生长因子100ng/ml、重组人转铁蛋白11ug/ml、抗坏血酸65ug/ml以及氢化可的松1uM；

所述重编程添加剂2包括碳酸钠543ug/ml、硒酸钠14ng/ml、重组人胰岛素20ug/ml、重组人碱性成纤维细胞生长因子100ng/ml、重组人转铁蛋白11ug/ml、抗坏血酸65ug/ml以及丙戊酸1mM以及丁酸钠150uM。

4.根据权利要求1所述的重编程培养基，其特征在于，所述基础培养基保存在4～8℃，所述重编程添加剂1及重编程添加剂2保存在-20～-80℃单独冰冻保存。

5.根据权利要求4所述的重编程培养基，其特征在于，所述重编程培养基在使用前配制成重编程培养基1和重编程培养基2，具体包括以下步骤：

在2～8℃化冻所述重编程添加剂1及重编程添加剂2；

将所述重编程添加剂1与所述基础培养基以7:500的体积配混合后形成所述重编程培养基1；

将所述重编程添加剂2与所述基础培养基以7:500的体积配混合后形成所述重编程培养基2。

6.根据权利要求5所述的重编程培养基，其特征在于，所述重编程培养基1和所述重编程培养基2在使用前0～14天配制，并在2～8℃保存。

7.一种重编程细胞的培养方法，其特征在于，采用如权利要求1至6中任一项所述的重编程培养基培养。

8.根据权利要求7所述的培养方法，其特征在于，包括以下步骤：

S1，将重编程细胞接种到铺有基质胶或玻璃粘连蛋白的培养皿中；

S2，向所述培养皿中加入重编程培养基1，每隔一天换一次所述重编程培养基1，在所述重编程培养基1中培养所述重编程细胞3～5天；

S3，去除所述重编程培养基1，向所述培养皿中加入重编程培养基2，每隔一天换一次所述重编程培养基2，在所述重编程培养基2中培养所述重编程细胞10～30天。