[发明专利]一种单疱病毒潜伏感染细胞模型的建立及活化方法

权利要求书

1.一种单疱病毒潜伏感染细胞模型的建立方法，包括如下的步骤：

1）原代兔角膜基质细胞的培养

将去掉内皮的兔角膜酶解消化处理后，去掉上皮层并剪成小块，放入细胞培养液中进行培养，培养结束后，将培养的原代角膜基质细胞经细胞消化液消化后用于后续的细胞诱导分化；

2）原代兔角膜基质细胞的神经潜质诱导

将步骤1）制备的兔角膜基质细胞先用细胞培养液培养至细胞长至单层，然后换细胞诱导分化液对角膜基质细胞进行神经潜质诱导分化，37℃条件下诱导分化7-10天，3-4天换液一次；

3）HSV-1静止感染诱导原代兔角膜基质细胞

HSV-1静止感染角膜基质细胞前一天，将细胞诱导分化液换成静止感染维持液，37℃孵育24hrs，然后加入0.1-1MOI的HSV-1，37℃感染过夜；吸弃HSV-1后加入新的静止感染维持液继续培养9天完成细胞模型建立。

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于所述的1）中的酶解消化，是将角膜放入Dispase酶中，4℃孵育过夜；然后放入37℃继续消化30分钟完成的。

3.如权利要求1所述的方法，其特征在于所述的1）中的细胞培养液的组成为DMEM-F12，且添加了10%（v/v）的FBS、终浓度为100U/mL青霉素和0.1mg/mL的链霉素；细胞经消化液为添加有0.25%（w/v）胰酶的0.02%（w/v）EDTA溶液。

4.如权利要求1所述的方法，其特征在于所述的2）中细胞诱导分化液为DMEM-F12，且添加有1%（w/v）BSA，50ng/mL注射用鼠神经生长因子NGF，终浓度分别为100U/mL和0.1mg/mL的青霉素和链霉素。

5.如权利要求1所述的方法，其特征在于所述的2）中的细胞诱导分化液为DMEM-F12，且添加有1%（w/v）BSA，50ng/mL注射用鼠神经生长因子NGF，终浓度分别为100U/mL和0.1mg/mL的青霉素和链霉素。

6.如权利要求1所述的方法，其特征在于所述的2）中的静止感染维持液为DMEM-F12，且加入1%BSA，50ng/mL注射用鼠神经生长因子NGF，100μM阿昔洛韦ACV，终浓度分别为100U/mL和0.1mg/mL的青霉素和链霉素。

7.一种单疱病毒潜伏感染细胞模型；其特征在于，所述的模型是由权利要求1所述的方法构建的。

8.权利要求7所述模型的活化方法，其特征在于，是向细胞模型中加入病毒激活因子Forskolin在37℃孵育完成活化。