[发明专利]一种中药注射液的核磁共振检测方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种中药注射液的检测方法，特别是涉及丹红注射液用核磁共振方式介导的检测方法，属于医药技术领域。 

背景技术

丹红注射液组方以丹参750份、红花250份组成，其中丹参为主药，红花为辅药的复方制剂。具有活血化瘀，通脉舒络，祛痰生新，除邪不伤正的功效。临床上用于治疗瘀血闭阻所致的胸痹及中风、冠心病、心绞痛、心肌梗塞等症。相关文献和专利已报道了有关丹红注射液的质量检测方法，建立了丹红注射液的高效液相色谱(HPLC)指纹图谱，尽管该方法具有许多优点，但仍然存在以下缺陷：①色谱分离损失：常用ODS色谱柱在分离过程中损失极性较大的水溶性成分。②缺乏通用型检测器：只能在同一张谱图下检测出某类或某几类化学成分。③标准品难分离：不易获得，为化学成分的鉴定和定量分析带来了困难，同时也提高了工业生产成本。因此，丹红注射液中的氨基酸、有机酸和糖类化合物是HPLC指纹图谱技术的检测盲点。 

近年由于核磁谱仪获得长足的进步，质子定量核磁(¹H-qNMR)的灵敏度、精确度、分析速度以及不确定度等方面已达到或接近HPLC的水平。在美国和欧洲¹H-qNMR方法因其特有优势而获得越来越多的关注，主要应用于药物的发现，药物含量测定和植物代谢产物的定量分析，在食品工业中用于食品产地的辨别、成分分析、真伪判定、质量评价等方面。继美国和欧洲等国将qNMR方法收录2008版药典之后，我国2010版药典也将qNMR方法收载于附录中。但在我国，定量核磁技术在药物或食品分析领域中的应用尚属起步阶段。与HPLC指纹图谱相比，以¹H-qNMR为基础的指纹图谱技术具有以下优势：①无需样品预分离，可避免由于预处理造成的成分丢失。②无需进行柱色谱分离，保持原有平衡环境，对样品无损伤，不破坏其结构和性质。③可提供详尽的分子结构信息，具有特征性和 可解析性。④无需标准对照品。质子信号峰与各个化学组分的氢原子一一对应，响应值和灵敏度无偏向性，质子信号峰的相对积分面积可反映各个化学组分的相对含量，不需额外制定标准曲线，具有可定量性。⑤随着400M-600M Hz核磁谱仪的普及和自动化的提高，仪器不再局限于科研院所，越来越多的药厂拥有一台甚至多台仪器，为该方法在工业生产中的应用提供了硬件保障。 

因此，本发明采用定性、定量的质子核磁共振指纹图谱技术，建立一种针对丹红注射液中氨基酸、有机酸和糖类化合物的质量检测方法，在工业生产中与HPLC指纹图谱联合使用，实现对丹红注射液产品的全面质量检测。 

发明内容

本发明目的是提供了一种名为丹红注射液的中药注射液的¹H-NMR指纹图谱质量检测方法，可以有效解决丹红注射液中氨基酸、有机酸和糖类化合物的含量测定问题，为丹红注射液全面质量检测奠定基础。 

本发明的技术方案是通过下列关键步骤实现的： 

①丹红注射液供试样品溶液的制备 

丹红注射液样品冻干后精密称取18mg，加入0.6ml D₂O，含内标3-三甲基硅基丙酸钠-d4(TSP)0.01g/ml，即得丹红注射液样品溶液，转移至5mm核磁管中，加封直接用于¹H-NMR测试。 

②标准品溶液的制备 

分别精密称取异亮氨酸、缬氨酸、苏氨酸、丙氨酸、乙酸、脯氨酸、焦谷氨酸、琥珀酸、天门冬氨酸、丙二酸、葡萄糖、果糖、半乳糖、鼠李糖、阿拉伯糖、甲酸各5mg，溶于0.6ml D₂O(含内标TSP0.004g／ml)，即得标准品溶液，转移至5mm核磁管中，加封直接用于¹H-NMR测试。 

③¹H-NMR指纹图谱的测定 

将核磁管置于核磁共振仪中，采用水峰抑制脉冲序列测定丹红注射液样品溶液的¹H-NMR指纹图谱和标准品溶液的¹H-NMR图谱。优化的测试参数及条件为：抑水峰序列zgcppr，观测频率600.23MHz，测定温度298K，谱宽12019.2Hz， 90°脉冲宽度13μs，采样数据点65536，扫描次数16次，延迟时间2s，接受增益128。 

④质子信号峰的解析与鉴定