[发明专利]基于亲和色谱测定超分子相互作用解离速率常数的方法

权利要求书

1.一种基于亲和色谱测定超分子相互作用解离速率常数的方法，该方法包括以下步骤：

（1）提供一种键合有目标主分子的亲和色谱柱；

（2）用流动相制备一定浓度的第一待分析客分子的样品溶液；

（3）以带流出方式将所述第一待分析客分子的样品溶液以一定流速注入色谱系统，采集第一待分析客分子在亲和色谱柱上的流出曲线，并通过峰拟合计算第一待分析客分子流出曲线的保留时间、半峰宽及塔板高度（H_R）；

（4）用与第一待分析客分子相同的流动相制备第二待分析客分子的样品溶液；

（5）采用与第一待分析客分子相同的方式获得第二待分析客分子流出曲线的保留时间、半峰宽及塔板高度（H_M,C）；

（6）按照（1）～（5）中所述的方法重复测定其他至少三个不同流速下的H_R和H_M,C；

（7）比较各个H_R与H_M,C的大小，若三分之二数目以上的H_R>H_M,C，则以H_M,C作为H_M采用公式（3）通过H_R-H_M对uk/(1+k)²做线性回归，由斜率计算k_d,app：

HR-HM=2ukkd,app(1+k)2---(3)]]>

其中，u为线速度，k为容量因子；

若三分之二数目以上的H_R<H_M,C，则按照一定的校正方法对H_M,C进行校正，得到H_M,T，并采用校正后的H_M,T作为H_M按照公式（3）计算k_d,app；

（8）按照（1）～（7）中所述的方法测定第一待分析客分子在空白色谱柱上的容量因子k_control和解离速率常数k_d,control；

（9）通过第一待分析客分子在亲和色谱柱与空白色谱柱上的容量因子比值判断第一待分析客分子与空白基质相互作用的强弱，并采用公式（4）计算k_d。（α_control为k_control与k的比值，α₁=1-α_control）

1kd,app=α1kd+αcontrolkd,control---(4).]]>