[发明专利]一种表达IBDV VP2和法氏囊素三肽嵌合蛋白重组火鸡疱疹病毒

权利要求书

1.一种表达IBDV VP2和法氏囊素三肽嵌合蛋白的重组火鸡疱疹病毒rHVT- BS10-VP2，其特征在于：其携带在启动子序列控制下的10拷贝法氏囊素三肽BS10嵌合IBDV VP2基因表达盒的基因序列如SEQ ID NO.1 所示。

2.根据权利要求1所述的表达IBDV VP2和法氏囊素三肽嵌合蛋白的重组火鸡疱疹病毒rHVT- BS10-VP2，其制备方法如下：

1) 10拷贝法氏囊素三肽BS10寡核苷酸的合成：选用编码赖氨酸Lys、组氨酸His和甘氨酸Gly的常用密码子按顺序排列成BS基因：5'-AAGCATGGC-3’，连续合成l0个BS，BS 串连基因单链及其反向互补链，通过退火使其复性成双链；

2) 含IBDV VP2 和BS10 嵌合基因表达盒的火鸡疱疹病毒HVT转移载体的构建: 根据已注册的GenBank NO .X00221.1的gpt基因序列设计引物，以E.coliDH₅α DNA为模板采用PCR方法扩增gpt基因，用其作为外源筛选基因，与质粒pEGFP中的CMV启动子及poly(A)连接构建gpt表达盒CMV-gpt-poly A，经酶切测序验证后，插入到含有火鸡疱疹病毒HVT非必需区US10、SORF3两侧基因的同源臂克隆质粒pUAB中，构建带有筛选基因表达盒的克隆质粒pUAB-gpt；将BS10-VP2 嵌合基因插入到pUAB-gpt中，获得重组火鸡疱疹病毒转移载体pUAB-gpt-BS10-VP2 ，大小为10100bp；

3) 表达嵌合蛋白的重组火鸡疱疹病毒的制备: 采用脂质体介导法，将重组转移载体质粒pUAB-gpt-BS10-VP2与HVT-FC126株基因共转染原代鸡胚成纤维细胞CEF，待出现病毒噬斑后，利用霉酚酸MPA阻断核酸代谢途径，经过筛选获得纯化的重组病毒rHVT- BS10-VP2。

3.如权利要求1 或2 所述的重组火鸡疱疹病毒rHVT-BS10-VP2，其在禽类宿主中诱导抗禽类疱疹病毒和鸡传染性法氏囊病毒的保护性免疫的应用。

4.如权利要求1 或2所述的重组火鸡疱疹病毒rHVT-BS10-VP2，其作为疫苗株的应用。

5.如权利要求3 所述的重组火鸡疱疹病毒rHVT-BS10-VP2，其作为疫苗株的应用。