[发明专利]一种测定保健食品中叶酸含量的色谱方法

说明书

技术领域

本发明属于高效液相色谱法（HPLC）在食品药品组分分析中的具体应用，具体通过对色谱条件的巧妙选择，实现对特定的复杂组分实际样品中叶酸的含量进行准确的定性和定量分析。

背景技术

叶酸是一种重要的B族维生素，其化学名称为碟酰谷氨酸，具有促进泌乳、健美皮肤、防止白发、增进食欲和防治口腔溃疡的功效，除了天然存在于绿叶蔬菜和动物肉蛋奶、肝脏中，其中在肝脏中含量最为丰富。除了天然存在以外，叶酸作为添加剂被适量加入到一些营养强化食品、保健食品中，准确测定叶酸含量对产品的生产加工、功效评价等有重要意义。叶酸测定目前多采用分光光度法和微生物测定法，微生物测定法具有设备简便、灵敏度高的特点，但需要时间长，分光光度法的方法选择性较差，特别对复杂成分的样品，干扰较大，检测结果准确性较差。高效液相色谱法虽然具有选择性好、灵敏度高的优点，特别对复杂组分样品中叶酸测定更显示其优越性，在国内外得到广泛应用。但是对某些特别复杂组分样品中叶酸的测定结果与理论值相差甚远，有待于以此为基础建立一套更加准确可靠的方法。

发明内容

1、要解决的问题

针对现有技术中存在的上述问题，本发明的目的在于提出一套HPLC方法测定保健食品中叶酸含量的具体条件，通过添加二乙三胺五乙酸和维生素C，掩蔽营养品样品中的微量元素离子，同时调节离子强度，选择与之配套的其他检测条件，得到色谱最佳峰形，有效解决不进行此项处理时结果偏离实际的问题，实现了直接对复杂基质保健食品中叶酸含量的准确测定。

2、技术方案  

为了解决上述问题，本发明所采用的技术方案如下：

一种测定保健食品中叶酸含量的色谱方法，其特征在于，包括以下步骤：

（1）检测样品处理：取适量样品磨细并称量，置于50ml棕色容量瓶中，加入适量DTPA和维生素C，用0.5％氨水超声使溶解，并控制PH=8~9，之后用少量0.5％氨水定容；取适量所得溶液于离心管中，离心约15 min，取上清液待测；

（2）标准品的制备：精密称取20mg叶酸对照品至一100 ml棕色容量瓶中，用0.5％氨水溶解并稀释至刻度，作为标准贮备液。精密吸取1 ml标准贮备液至一10ml容量瓶中，用0.5％氨水溶解并稀释至刻度，作为标准工作溶液；

（3）色谱条件设定：

a. 色谱柱：采用5 μm反相C8色谱柱（250 mm ×416 mm）；

b. 流动相：

流动相A： 0.05M Na₃PO₄ (pH 2.5)：甲醇=90：10;

流动相B： 0.05M Na₃PO₄(pH 2.5)：甲醇=10：90;

梯度： 在18 min时达70% B

流速： 1 mL/min；

c. 检测器及检测波长：用二极管阵列检测器对叶酸标准溶液进行光谱扫描，在280 nm处有最大吸收峰，因此在检测试验中选择波长为280 nm；

d. 进样量：20 μL；

e. 柱温：30 °C

（4）进样前，将样品用0.45 μm过滤器过滤；

（5）通过待测样品与标准品的保留时间和峰面积关系进行对比，确定样品。

进一步的，所述步骤（1）中的DTPA和维生素C也可应用结构与它们类似，功能十分相近的EDTA、抗坏血酸钠盐、钾盐等相似物质。

进一步的，所述步骤（3）中还可应用类似C8色谱柱的反相柱。

更进一步的，测定对象名称不仅限于保健品，也可以是膳食补充剂或含有叶酸的药品等非保健品，或是生物及其制品。

3、有益效果

相比于现有技术，本发明的有益效果为：

本发明通过添加DTPA和维生素C后可以在检测时有效排除Zn、Fe等元素对检测的干扰，解决了通常方法检测时结果严重偏离实际值的问题，从而实现了直接对复杂基质保健食品中叶酸含量的准确测定。

附图说明

图1为原有和新型色谱方法对叶酸含量进行测定所得谱图；