[发明专利]固相合成布舍瑞林的方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种布舍瑞林的合成方法，尤其涉及一种纯度高、高收率的合成布舍瑞林的方法。

背景技术

布舍瑞林（Buserelin）是一种水溶性多肽类药物，为下丘脑分泌的天然促性腺激素释放激素（GnRH/LHRH）类似物，可促进黄体生成激素LH、促卵胞生成激素FSH和性激素分泌增加，药理效应为LHRH的20-170倍，长期给予布舍瑞林可以抑制绒促性素的生成，并抑制卵巢和睾丸类固醇的生成。布舍瑞林的主要临床应用包括姑息治疗激素依赖的前列腺癌（D期）、乳腺癌、无需手术治疗的子宫内膜异位症等疾病的治疗。

布舍瑞林结构为Pyr-His-Trp-Ser-Tyr-D-Ser(tBU)-Leu-Arg-Pro-NH-Et，现有的合成布舍瑞林的方法主要有两种：

第一种是片段缩合法，即将布舍瑞林拆分成几个片段（如两个）分别合成，所合成的各个裸肽片段在液相条件下进行偶联，如CN101735308A公开的4+5片段合成方法，先合成五片段Pyr-His-Trp-Ser-Tyr-OH和四片段D-Ser(tBU)-Leu-Arg-Pro-NHEt，然后缩合得到布舍瑞林。这种片段缩合方法的缺陷非常明显，工艺操作繁琐；更重要的是，片段偶联过程中，多肽发生消旋反应的现象比较严重；另外且最终收率较低。

第二种是全序列部分保护合成方法，即在固相合成过程中，对部分氨基酸侧链进行保护，并最终在液相中实现乙氨基化，此工艺虽然实现在固相载体上的全序列合成，但是由于采用的是部分保护，所以合成过程中引入的杂质较多，出产品的质量很差，纯化过程中较难分离，很难得到高质量的产品，且综合收率不高。

CN101935339A公开了一种全保护合成布舍瑞林的方法，固相合成布舍瑞林后，裂解去除树脂，然后将全保护肽经过乙氨基化、裂解脱除保护基的步骤得到布舍瑞林，该方法无论是乙氨基化过程，在冰水浴条件下进行，不适于工业化操作。WO2008/044890公开了一种合成布舍瑞林的方法，分别合成Pro-NH-Et和Pyr-His-Trp-Ser-Tyr-D-Ser(tBU)-Leu-Arg-OH，然后偶联、去除保护基获得布舍瑞林；该方法先通过氨基酸偶联获得肽链，之后先脱除树脂，然后再偶联氨基酸Pro-NH-Et，实际操作过程中，工艺变化非常繁琐。

发明内容

针对现有技术中合成布舍瑞林的方法产率低、纯度低、和操作繁琐的问题，本发明提供了一种新的合成布舍瑞林的方法。

本发明提供了一种固相合成布舍瑞林的方法，步骤包括：

步骤1，提供如结构式（I）乙胺基载体树脂EtNH-Supporting Resin；

步骤2，以所述乙胺基载体树脂为固相合成多肽树脂，偶联Fmoc-Pro-OH，脱除保护基，得到NH₂-Pro-EtN-Supporting Resin；

步骤3，NH₂-Pro-EtN-Supporting Resin与Fmoc-Arg(PG1)-OH偶联得到NH₂-Arg(PG1)-Pro-NEt-Supporting Resin；其中，PG1为Arg侧链保护基团；

步骤4，依次偶联布舍瑞林肽链中的其它氨基酸，得到Pyr-His(PG6)-Trp(PG5)-Ser(PG4)-Tyr(PG3)-D-Ser(tBU)-Leu(PG2)-Arg(PG1)-Pro-NEt-Supporting Resin；其中，PG1至PG6分别独立的为氨基酸侧链保护基团，或者不存在；

步骤5，酸性条件下进行裂解脱除载体树脂，得到全保护肽：

Pyr-His(PG6)-Trp(PG5)-Ser(PG4)-Tyr(PG3)-D-Ser(tBU)-Leu(PG2)-Arg(PG1)-Pro-NHEt；

步骤6，所述全保护肽通过氢化反应脱除PG1至PG6，得到布舍瑞林。

在本发明所述的方法中，所述载体树脂中的polymer可以是任意用于固相合成多肽的树脂聚合物中的一种或几种，并优选为聚苯乙烯、苯乙烯-苯二乙烯交联树脂、聚丙烯酰胺、聚乙烯-乙二醇树脂等，并优选为聚苯乙烯（PS）。

在本发明所述的方法中，步骤1中所述合成的载体树脂EtNH-Supporting Resin中，乙胺基取代度优选为0.8-1.0mmol/g，即可以含有部分未取代乙胺基的载体树脂。

其中，所述EtNH-Supporting Resin的合成方法优选为：