[发明专利]一种基于点击化学和G四聚体的铜离子检测试剂盒以及检测方法

权利要求书

1.一种基于点击化学和G四聚体的铜离子检测试剂盒，其特征在于，包括以下成分：

两段G四聚体形成序列，第一序列G1为5’-GTGGGT AGG-N=N=N-3’，在其3’端修饰叠氮基团，第二序列G2为5’-CH≡CH-GCGGG TTGGG-3’，其’端修饰炔基基团；所述第一序列的叠氮基团和所述第二序列的炔基基团通过Gu⁺催化的环加成反应而连接形成一条G四聚体形成序列；

抗坏血酸钠，粉末形式；

PBS反应液，含有0.2M NaCl；

高铁血红素，粉末形式；

1M KCl；

0.05%（w/v）H₂O₂；

0.05%（w/v）四甲基联苯胺，即TMB；以及

浓H₂SO₄，作为终止反应液。

2.根据权利要求1所述的铜离子检测试剂盒的铜离子检测方法，其特征在于，包括以下步骤：

1）将第一序列G1、第二序列G2、待检测样品和抗坏血酸钠先后加入PBS反应液中，混匀，20-25反应1小时，使G1的叠氮基团和G2的炔基基团通过Gu⁺催化的环加成反应而连接起来，形成一条G四聚体形成序列；

2）在上述反应液中加入高铁血红素和KCl，充分震荡反应，使高铁血红素和所述G四聚体形成序列形成具有HRP的活性高铁血红素/G四聚体结构；

3）在上述溶液中加入H₂O₂和TMB，所述高铁血红素/G四聚体能够催化无色的TMB形成有色的底物；

4）加入浓H₂SO₄终止反应，观察溶液颜色的变化；如果所述待检测样品含有Cu²⁺，溶液的初始颜色为无色，加入H₂SO₄后颜色变为黄色，黄色的深浅可以间接表明Cu²⁺的浓度；

5）将上述液体转移到酶标板中，使用酶标仪读取每个孔中的溶液在450nm处的OD值，对Cu²⁺的含量进行定量分析。