[发明专利]云芝及含有云芝的制剂的检测方法

权利要求书

1.一种云芝及含有云芝的制剂的检测方法，其特征在于云芝及含有云芝的制剂采用醇沉提取粗多糖，用酸水解多糖成单糖碎片，再对单糖衍生反应制成供试品溶液，采用超高效液相色谱法或/和高效液相色谱法检测供试品溶液中的甘露糖、葡萄糖、半乳糖和岩藻糖的单糖碎片的特征图谱及其各单糖的含量，建立特征图谱，通过各单糖的特征峰的相对保留时间或/和峰面积以及含量来控制和评价云芝药材及其制剂的质量。

2.根据权利要求1所述的云芝及含有云芝的制剂的检测方法，其特征在于：所述的供试品溶液的制备方法是：

取云芝药材3～6g，加水适量，加热回流提取，提取液离心，量取适量提取液,减压浓缩至适量，或取云芝制剂0.5～1g，加水使溶解；加入3～6倍体积的无水乙醇，分取沉淀，沉淀加水溶解，并加入重量含量10%的稀硫酸，100-120℃加热回流水解5-6小时，水解后溶液调pH至中性并定容，吸取上清液，置具塞试管中，加入0.5mol/L 的NaOH溶液和PMP的甲醇溶液，于60～80℃衍生化反应30-60min，反应完全后调pH至中性并定容，取上清液加等体积三氯甲烷振摇提取，弃去有机溶液，重复操作3次，水溶液减压浓缩至适量用乙腈定容，作为供试品溶液。

3.根据权利要求1所述的云芝及含有云芝的制剂的检测方法，其特征在于，所述的超高效液相色谱检测条件：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，流速为0.3～1.0毫升/分钟；检测波长245nm；以乙腈为流动相A，以磷酸缓冲盐溶液为流动相B，进行流动相梯度洗脱；

所述的磷酸缓冲盐溶液配置方法：称取K₂HPO₄ 4.4g，加水800mL溶解，加磷酸调pH至6.5，并加水稀释至1000mL。

4.根据权利要求1所述的云芝及含有云芝的制剂的检测方法，其特征在于：所述的高效液相色谱检测条件是以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，流速为0.8～1.5毫升/分钟；检测波长245nm；以乙腈为流动相A，以磷酸缓冲盐溶液（称取K₂HPO₄ 4.4g，加水800mL溶解，加磷酸调pH至6.5，并加水稀释至1000mL）为流动相B，进行流动相梯度洗脱。

5.根据权利要求1所述的云芝及含有云芝的制剂的检测方法，其特征在于：所述的特征图谱的建立方法是：取D-甘露糖、D-葡萄糖、半乳糖和L-岩藻糖对照品适量，加水溶解，按权利要求2所述的“供试品溶液”的衍生方法制备混合对照品溶液，分别精密吸取混合对照品溶液和供试品溶液，注入液相色谱仪，测定各单糖含量；供试品溶液的特征图谱中应呈现甘露糖、葡萄糖、半乳糖、岩藻糖4个特征峰，其应分别与相应的参照物峰的保留时间相一致，以其中任意一个参照物峰相对应的峰为S峰，计算各特征峰与S峰的相对保留时间、相对峰面积，其相对保留时间应在规定值的±5～10%范围之内，相对峰面积可上下浮动10～30%。